中国云南地区库蠓源Palyam血清群环状病毒（PALV）的分离鉴定及牛群感染状况研究

本研究首次从中国云南地区的库蠓（Culicoides spp.）中分离出三种Palyam血清群环状病毒（PALV）新毒株（MY_C17、ML_C40、SZ_C06），通过高通量测序获得全基因组序列，系统进化分析揭示其地理分型特征（亚洲群、澳大利亚群、非洲群及CI群）。血清学调查显示当地牛群对Chuzan病毒（CHUV）、Bunyip Creek病毒（BCV）和D'Aguilar病毒（DAGV）的中和抗体阳性率分别为16.9%、3.4%和6.9%，证实该地区存在三种PALV血清型的自然传播链，为亚洲首次从媒介昆虫中分离到BCV和DAGV，对理解虫媒病毒跨种传播机制及家畜疫病防控具有重要意义。

　　

引言

Palyam血清群环状病毒（PALV）是呼肠孤病毒科环状病毒属成员，主要分布于亚洲、非洲和澳大利亚，通过蚊、蠓和蜱传播，可导致反刍动物流产和畸形。其中Chuzan病毒（CHUV）是亚洲地区代表性血清型，1985年日本首次报道其引起犊牛先天性脑积水和小脑发育不全（HCH综合征）。中国此前仅在云南、广西和青藏高原的牛、牦牛中检出CHUV，其他血清型未见报道。

材料与方法

2022-2023年从云南景洪、勐腊和师宗县的牛棚采集库蠓标本（共10,800只，108池），经C6/36和BHK-21细胞培养分离病毒。采用高通量测序（NGS）获取全基因组，通过FLAC技术扩增病毒dsRNA。系统进化分析基于Seg-5/NS1、Seg-7/VP7和Seg-9/VP6的保守基因及血清型决定蛋白VP2（Seg-2）。对350份牛血清进行中和试验（SNT），检测BCV、DAGV和CHUV抗体。

结果

病毒分离与鉴定：从库蠓中获得三株PALV（MY_C17、ML_C40、SZ_C06），分别属于D'Aguilar（DAGV）、Chuzan（CHUV）和Bunyip Creek（BCV）血清型。基因组长度18,881-18,923 bp，G+C含量38.85%-39.31%，各片段5′端保守序列为GUUAAA，3′端为CUUAC（Seg-9例外为CAUAC）。

系统进化特征：

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  NS1/VP7/VP6：按地理起源分为亚洲群（含中国分离株）、澳大利亚群、非洲群和CI群（中非+印度株）。亚洲群内NS1 nt/aa同源性≥94.3%/96.8%，VP7≥90.3%/97.7%，VP6≥93.0%/91.9%。

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  VP2：所有PALV分为6个进化分支（A-F组），对应不同血清型：A组（CHUV/Kasba/Vellore/Abadina）、B组（Gweru/CSIRO）、E组（BCV/Apies River/Marondera）和F组（DAGV）。中国分离株ML_C40（CHUV）、SZ_C06（BCV）和MY_C17（DAGV）分别归属A、E、F组。

血清流行病学：云南牛群PALV总抗体阳性率27.1%（95/350），其中CHUV阳性率最高（16.9%），DAGV（6.9%）和BCV（3.4%）次之，表明三种血清型在自然界共循环。

讨论

本研究首次在中国库蠓中鉴定出BCV和DAGV，扩展了PALV在亚洲的血清型谱。VP2的高变异性（aa同源性仅35.4%-54.4%）与免疫选择压力相关，而NS1/VP7的保守性（aa同源性>91.9%）支持其作为诊断靶点。值得注意的是，日本株ON-14/E/17的VP7聚类于澳大利亚群，提示存在基因重配事件。建议将现有13种PALV血清型归并为8类，但需进一步血清学验证。

结论

云南地区存在CHUV、BCV和DAGV三种PALV血清型的自然传播循环，库蠓可能是潜在媒介。该发现为制定家畜PALV防控策略提供科学依据，并凸显跨境虫媒病毒监测的重要性。