Spautin-1通过诱导线粒体损伤介导的PANoptosis和抗肿瘤免疫抑制弥漫大B细胞淋巴瘤生长的机制研究

本研究针对复发/难治性弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)预后差的临床难题，揭示了去泛素化酶抑制剂Spautin-1通过抑制USP13-ACLY轴诱导线粒体损伤，进而激活PANoptosis（一种整合凋亡、坏死性凋亡和焦亡的新型细胞死亡方式）并促进CD8+T细胞浸润的分子机制，为DLBCL治疗提供了新型靶向策略。

　　

弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)作为非霍奇金淋巴瘤最常见的亚型，其ABC亚型患者对标准R-CHOP方案耐药率高，临床亟需突破性治疗策略。近年来，靶向泛素-蛋白酶体系统的药物（如硼替佐米）虽展现出潜力，但调控蛋白稳态的去泛素化酶(DUBs)在DLBCL中的作用尚不明确。Jingjing Wu团队在《Cancer Immunology, Immunotherapy》发表的研究，首次揭示了小分子抑制剂Spautin-1通过双重机制——直接诱导肿瘤细胞PANoptosis和激活抗肿瘤免疫——实现DLBCL抑制的创新成果。

研究采用CCK-8检测细胞增殖、小鼠异种移植模型评估体内疗效，结合RNA-seq转录组分析、透射电镜观察线粒体超微结构、流式细胞术检测ROS和线粒体膜电位等技术。关键实验材料包括5种DLBCL细胞系（SU-DHL-4/6、OCI-Ly3/10、A20）和免疫健全/缺陷小鼠模型。

Spautin-1抑制DLBCL细胞生长

通过剂量梯度实验证实Spautin-1对GCB/ABC亚型细胞均具有增殖抑制作用（IC₅₀ 3-30 μM），小鼠移植瘤体积减少57.17%（免疫健全型）和41.79%（免疫缺陷型），提示其疗效部分依赖免疫微环境。

Spautin-1促进抗肿瘤免疫

免疫荧光显示Spautin-1组肿瘤中CD3⁺/CD8⁺T细胞浸润增加2.1倍，ELISA检测到IFN-γ和颗粒酶B显著升高（P<0.01），同时趋化因子CCL5/CXCL9/CXCL10 mRNA表达上调，证实其重塑免疫冷肿瘤微环境的能力。

Spautin-1诱导PANoptosis

RNA-seq富集分析发现凋亡/坏死性凋亡通路激活，Western blot显示RIPK1/3、p-MLKL（坏死性凋亡标志物）、GSDMD（焦亡执行蛋白）和活化的Caspase3同步升高，而抗凋亡蛋白Bcl2下降，TUNEL阳性细胞增加3.8倍（P<0.01），符合PANoptosis特征。

线粒体损伤机制解析

透射电镜观察到Spautin-1处理组线粒体嵴断裂，JC-1检测显示膜电位下降62%（P<0.01），伴随ROS爆发。关键发现是Spautin-1通过抑制USP13介导的ACLY蛋白去泛素化降解（非转录调控），MG-132处理可逆转该效应，证实其通过泛素-蛋白酶体途径调控ACLY稳定性。

临床相关性验证

生物信息学分析显示USP13在ABC亚型高表达（GSE23501数据集，P=0.003），与患者不良预后显著相关（5年生存率降低34%）。组织微阵列证实USP13高表达组CD8⁺T细胞浸润减少41%（P=0.008），为临床转化提供依据。

该研究创新性在于：首次阐明Spautin-1通过USP13-ACLY-线粒体损伤轴触发PANoptosis，同时释放HMGB1/IL-1β等损伤相关分子模式(DAMPs)激活抗肿瘤免疫的双重机制。特别值得注意的是，其在ABC亚型（当前治疗难点）中的显著效果，为克服DLBCL耐药性提供了新思路。未来研究可探索Spautin-1与PD-1抑制剂联用的协同效应，以及USP13作为预后生物标志物的临床价值。