非洲猪瘟病毒A179L通过降解IFITM1抑制NF-κB信号通路的机制研究

本研究揭示了非洲猪瘟病毒（ASFV）免疫逃逸的新机制：其编码蛋白A179L通过靶向干扰素诱导跨膜蛋白1（IFITM1）并促进E3泛素连接酶MARCH8介导的K48泛素化降解，从而抑制NF-κB信号通路激活。研究人员利用酵母双杂交、CRISPR-Cas9基因敲除和重组病毒构建等技术，首次发现IFITM1通过结合IKKβ促进其磷酸化以激活NF-κB，而A179L通过破坏该过程抑制炎症因子产生。该成果发表于《Cell Communication and Signaling》，为ASFV免疫调控机制提供了新靶点。

　　

非洲猪瘟（ASF）是由非洲猪瘟病毒（ASFV）引起的烈性传染病，自2018年传入中国后对养猪业造成毁灭性打击。这种拥有170-193 kb基因组的复杂DNA病毒编码超过150种蛋白，其中多个蛋白已被证实可通过抑制干扰素（IFN）和核因子κB（NF-κB）等通路逃逸宿主免疫。然而，作为ASFV唯一Bcl-2样蛋白的A179L，其除抗凋亡外的功能始终是未解之谜。

研究团队发现，ASFV感染虽能诱导IFITM1转录，但其蛋白水平在感染后期却异常下降。通过酵母双杂交筛选，首次鉴定出A179L与IFITM1的直接相互作用。进一步实验揭示，IFITM1能结合IKKβ并促进其磷酸化，从而激活NF-κB通路并上调肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-1β（IL-1β）等炎症因子。而A179L通过招募E3泛素连接酶MARCH8，促使IFITM1发生K48泛素化降解，最终抑制NF-κB信号传导。

关键技术包括：1）构建A179L基因缺失的重组病毒ASFV-ΔA179L；2）利用CRISPR-Cas9建立ST-IFITM1和ST-MARCH8基因敲除细胞系；3）通过双荧光素酶报告系统检测NF-κB活性；4）采用免疫共沉淀（Co-IP）验证蛋白互作；5）使用泛素化突变体（Ub-K48O/K48R）解析降解机制。

A179L抑制NF-κB信号通路

实验显示A179L能显著抑制由cGAS-STING或TNF-α诱导的NF-κB启动子活性，并降低IκBα和NF-κB的磷酸化水平。在ASFV感染中敲低A179L表达后，炎症因子转录水平显著升高。

A179L与IFITM1相互作用

通过酵母双杂交筛选出18个潜在互作蛋白，经Co-IP和免疫荧光证实A179L特异性结合IFITM1。截断实验表明A179L的30-40氨基酸区域对抑制NF-κB至关重要。

IFITM1激活NF-κB的机制

IFITM1过表达可增强IKKβ磷酸化，而IFITM1敲除细胞对TNF-α刺激的NF-κB响应显著减弱。这是首次发现IFITM1通过直接结合IKKβ调控NF-κB通路。

A179L促进IFITM1降解

ASFV感染后期IFITM1蛋白水平下降，而A179L通过泛素-蛋白酶体途径加速其降解。K48泛素化实验证实A179L特异性促进IFITM1的K48链泛素化修饰。

MARCH8介导的降解机制

A179L增强IFITM1与E3连接酶MARCH8的结合，在MARCH8敲除细胞中A179L无法诱导IFITM1降解，回补实验验证了该机制的特异性。

重组病毒验证

构建的ASFV-ΔA179L病毒在猪肺泡巨噬细胞（PAMs）中显示NF-κB通路激活增强，且IFITM1蛋白积累量显著高于野生型病毒。

该研究不仅阐明了IFITM1作为NF-κB正向调控因子的新功能，更揭示了ASFV通过A179L-MARCH8轴降解IFITM1实现免疫逃逸的精确机制。相较于已知的ASFV免疫抑制蛋白（如A238L、DP71L），A179L采取独特的"宿主蛋白降解"策略，这为开发靶向宿主-病毒互作的抗ASFV药物提供了新思路。研究还解释了为何IFITM1对ASFV的抑制弱于IFITM2/3——因其被病毒特异性拮抗，这一发现为理解干扰素诱导蛋白的功能分化提供了重要参考。