CRISPR同源定向修复（HDR）在IAL-PiD2昆虫细胞中的优化：基于试剂递送与细胞周期同步的精准基因编辑策略

这篇研究通过优化CRISPR/Cas9同源定向修复（HDR）在鳞翅目昆虫IAL-PiD2细胞中的效率，系统评估了转染试剂、Cas9:sgRNA摩尔比（1:1最佳）、供体DNA浓度（0.66 pmol，约3.97×1011拷贝）及细胞周期同步（羟基脲处理后4小时转染效率提升1.57倍）等关键参数，为昆虫细胞非病毒基因编辑、功能基因组学及重组蛋白生产提供了可扩展方案。

　　

Highlight

Cas9:sgRNA化学计量比揭示高Cas9比例促进HDR

高效精准的CRISPR/Cas9编辑依赖于稳定且活跃的Cas9:sgRNA核糖核蛋白（RNP）复合物。研究表明，Cas9:sgRNA的最佳摩尔比因目标生物、细胞类型和修复途径而异，文献报道范围从1:1至1:26不等。在多数体系中，低Cas9比例倾向于非同源末端连接（NHEJ）介导的突变，而实现高效HDR常需更高浓度的Cas9。

Conclusions and Future Outlook

本研究为鳞翅目昆虫IAL-PiD2细胞系建立了CRISPR/Cas9介导的同源定向修复（HDR）高效框架。通过系统优化RNP化学计量（Cas9:sgRNA）、供体DNA模板浓度及细胞周期同步，显著提升了HDR效率——即使在高度重复的Fib-H基因位点亦表现优异。其中，Cas9:sgRNA摩尔比与细胞周期调控的协同作用尤为关键，为昆虫细胞基因编辑的工业化应用铺平道路。

（注：翻译部分保留了专业术语如RNP、NHEJ等英文缩写，并采用生动表述如"铺平道路"增强可读性，同时严格遵循原文的上下标格式，如10¹¹。）