γ射线灭活寨卡病毒疫苗的安全性与免疫原性研究：泰国分离株的临床前评估

推荐：为解决寨卡病毒(ZIKV)疫苗开发的关键问题，泰国玛希隆大学团队通过γ射线(25/50 kGy)灭活泰国ZIKV分离株SV0127/14，证实其完全丧失感染性但保留E蛋白抗原性。小鼠实验显示该疫苗安全且能诱导ZIKV特异性IgG和T细胞(IFN-γ+/TNF-α+)反应，虽中和抗体(NAb)效价较低，但为无化学残留的物理灭活疫苗开发提供了新思路。

　　

寨卡病毒(ZIKV)作为蚊媒传播的黄病毒，自2015年巴西暴发疫情以来持续威胁全球公共卫生安全，尤其对孕妇可导致胎儿小头畸形等严重后果。尽管80%感染者无症状，但泰国等热带地区长期存在低水平传播。目前尚无商业疫苗上市，DNA/mRNA疫苗尚处临床试验阶段，而传统甲醛灭活疫苗存在化学残留风险。在此背景下，物理灭活疫苗的研发成为新方向。

泰国玛希隆大学诗里拉吉医院免疫调节卓越研究中心的研究团队创新性采用γ射线灭活技术，以泰国本土分离株ZIKV SV0127/14为研究对象，在《Vaccine: X》发表重要成果。研究通过25/50 kGy剂量γ射线处理病毒，结合透射电镜(TEM)、Western blot等技术验证病毒形态和E蛋白完整性，采用BALB/c小鼠模型评估疫苗安全性和免疫反应。

关键技术包括：1) 钴-60源γ射线灭活病毒；2) 透射电镜观察病毒形态；3) 流式细胞术检测CD4⁺/CD8⁺ T细胞胞内细胞因子(IFN-γ/TNF-α)；4) 聚焦减少中和试验(FRNT)测定中和抗体；5) 使用Alhydrogel?铝佐剂增强免疫应答。

【γ射线灭活ZIKV的特征】

透射电镜显示25/50 kGy辐照后病毒颗粒形态完整，Western blot证实53 kDa E蛋白抗原表位保留。RT-PCR/qRT-PCR验证辐照完全破坏病毒复制能力，25 kGy即达完全灭活标准。

【预免疫人血浆反应】

84.6%泰国健康捐赠者血浆存在交叉反应抗体(FRNT₅₀≥80)，ELISA证实辐照疫苗与活病毒抗体结合能力无统计学差异，提示抗原表位保留良好。

【小鼠安全性】

两次皮下接种(0.1 μg/剂)后42天观察期内，所有组别均无死亡或局部反应，体重增长曲线与PBS对照组无显著差异，证实疫苗安全性。

【体液免疫应答】

ELISA显示25 kGy+铝佐剂组诱导更高ZIKV特异性IgG，但FRNT₅₀中和效价普遍偏低，提示低剂量抗原可能不足以激发强中和反应。

【细胞免疫应答】

流式检测发现铝佐剂组CD4⁺ T细胞产生更多IFN-γ/TNF-α，且双阳性细胞罕见。CD4⁺反应强于CD8⁺，符合辅助T细胞在抗病毒免疫中的核心作用。

讨论指出，这是首项系统评估γ射线灭活ZIKV疫苗的临床前研究。虽然25 kGy符合国际原子能机构(IAEA)医疗灭菌标准，且能保留结构蛋白抗原性，但低剂量(0.1 μg)接种导致中和抗体应答不足。研究创新点在于：1) 建立无化学残留的物理灭活工艺；2) 证实γ射线对黄病毒颗粒的结构保护作用；3) 发现铝佐剂对Th1型细胞反应的增强趋势。

该研究为后续剂量优化指明方向：需提高抗原剂量(参考甲醛灭活疫苗2.5-10 μg标准)、探索新型佐剂、采用IFN缺陷动物模型进行攻毒实验。这些发现对发展适用于孕妇等特殊人群的安全疫苗具有重要价值，为应对ZIKV地方性流行提供了新的技术储备。