基于同源定向修复的精准T细胞基因编辑平台为先天性免疫缺陷疾病提供治疗新策略

为解决先天性免疫缺陷疾病(IEI)基因治疗中传统CRISPR/Cas9策略可能破坏基因表达的难题，挪威奥斯陆大学分子医学中心团队开发了基于同源定向修复(HDR)的T细胞单核苷酸变异(SNV)精准校正平台。该研究以STAT1功能获得性突变(STAT1-GOF)等四种IEI为模型，实现高达80%的编辑效率并证实功能修复，通过多组学安全评估验证其临床转化潜力，为单基因免疫疾病提供了可推广的个体化治疗新方案。

　　

先天性免疫缺陷疾病(IEI)是一类由单基因突变导致的免疫系统功能障碍疾病，传统治疗方法如造血干细胞移植存在配型困难、移植物抗宿主病等局限。尽管CRISPR/Cas9基因编辑技术为IEI治疗带来希望，但当前主流的基因敲除或cDNA敲入策略可能破坏基因的正常调控，尤其对于需要精确修复单核苷酸变异(SNV)的病例。如何实现安全高效的精准基因校正，成为领域内亟待突破的技术瓶颈。

挪威奥斯陆大学分子医学中心(Centre for Molecular Medicine Norway, University of Oslo)的Katariina Mamia等研究人员开发了基于同源定向修复(Homology Directed Repair, HDR)的T细胞SNV精准校正平台。研究选取STAT1功能获得性突变(STAT1-GOF)、软骨毛发发育不良(CHH)、ADA2缺陷症(DADA2)和自身免疫性多内分泌腺病-念珠菌病-外胚层营养不良(APECED)四种典型IEI作为疾病模型，在《Molecular Therapy》发表的研究成果表明，该平台不仅实现高达80%的编辑效率，更通过多维度安全评估体系证实其临床转化价值。

研究团队运用四项关键技术：1) 优化HDR模板设计实现高效SNV校正；2) 采用GUIDE-seq技术全基因组检测脱靶效应；3) 结合单细胞RNA测序和长读长基因组测序分析转录组完整性；4) 通过蛋白质组学评估编辑后细胞功能。

研究结果显示：

"编辑效率验证"部分证实，针对不同IEI模型设计的gRNA和修复模板组合，在原发性T细胞中可获得40-80%的校正效率，其中STAT1-GOF模型的校正率最高。

"功能挽救实验"通过磷酸化流式细胞术证实，校正后的STAT1-GOF患者T细胞中STAT1异常激活信号恢复正常，CHH模型患者的端粒酶活性得到显著改善。

"安全性评估"章节显示，经过编辑的T细胞在全基因组范围内未检测到显著脱靶事件，单细胞转录组保持正常异质性，蛋白质组分析未发现异常表达谱。

该研究创新性地建立了可推广的HDR-SNV编辑技术体系，其重要意义在于：1) 突破传统基因敲除策略的局限性，实现致病位点的"原位修复"；2) 为不适合造血干细胞移植的进展期患者提供替代性治疗方案；3) 多组学安全验证体系为临床转化设立新标准。研究人员特别指出，该平台的技术通用性使其可扩展至其他单基因免疫疾病的治疗开发，标志着精准基因编辑向临床应用的实质性迈进。