塞内卡谷病毒3C蛋白酶通过切割TRIM32拮抗其抗病毒作用机制研究

这篇研究揭示了塞内卡谷病毒（SVV）如何通过其3C蛋白酶（3Cpro）靶向切割宿主抗病毒因子TRIM32，从而逃逸宿主的天然免疫防御。研究发现TRIM32通过泛素-蛋白酶体途径降解病毒VP3蛋白抑制SVV复制，而3Cpro通过切割TRIM32的E332位点使其丧失抗病毒功能，并削弱I型干扰素（IFN）信号通路。该研究为理解病毒免疫逃逸策略提供了新视角。

　　

SVV感染诱导TRIM32降解与切割

塞内卡谷病毒（SVV）感染可导致宿主细胞中TRIM32蛋白的降解和切割，产生两个特异性片段。这一现象在BHK-21、HEK-293T和PK-15细胞中均被证实，且与转录水平无关。其他病毒如猪流行性腹泻病毒（PEDV）和伪狂犬病毒（PRV）虽能降解TRIM32，但未观察到切割现象，提示SVV 3C^pro的作用具有特异性。

TRIM32抑制SVV增殖

通过siRNA敲低和CRISPR-Cas9基因编辑技术，研究发现TRIM32缺失显著促进SVV复制，而过表达则抑制病毒滴度及VP3蛋白表达。重组表达绿色荧光蛋白的SVV（rSVV-eGFP）感染实验进一步验证，TRIM32的缺失增强荧光信号，而过表达则显著减弱感染效率，证实其抗SVV活性。

SVV 3C^pro介导TRIM32切割的分子机制

SVV 3C^pro通过靶向TRIM32的E332位点进行切割，生成N端（1-332）和C端（333-680）片段。体外切割实验显示，野生型3C^pro可特异性切割TRIM32，而蛋白酶活性缺失突变体（H48A/C160A）则无此功能。值得注意的是，仅SVV 3C^pro具有切割TRIM32的能力，其他小RNA病毒（如EMCV、FMDV）的3C蛋白酶无此活性。

切割产物丧失抗病毒功能

TRIM32通过其N端RING结构域与SVV VP3蛋白结合，并介导其K48-linked泛素化降解。然而，3C^pro切割后的N端片段（1-332）虽保留VP3结合能力，却无法触发泛素化降解；C端片段（333-680）则完全丧失相互作用。切割位点突变体（E332A）表现出更强的抗病毒活性，进一步证实E332是3C^pro作用的关键位点。

TRIM32调控I型干扰素通路的双重角色

除直接靶向病毒蛋白外，TRIM32还通过K63-linked泛素化修饰STING，促进其与TBK1的结合，从而激活IFN-β信号通路。然而，切割后的TRIM32片段无法诱导STING泛素化或增强STING-TBK1相互作用，导致IFN-β、ISG56和OAS1等抗病毒效应分子表达下调。有趣的是，在STING或TBK1敲除的细胞中，TRIM32仍能抑制SVV复制，提示其抗病毒机制存在IFN非依赖性途径。

研究意义与展望

该研究阐明了SVV通过3C^pro切割TRIM32逃逸宿主防御的双重机制：既阻断其对病毒蛋白的降解，又抑制天然免疫信号通路。这一发现为理解小RNA病毒与宿主的博弈提供了新范式，并为开发靶向TRIM32-3C^pro相互作用的抗病毒策略奠定理论基础。未来研究可进一步探索TRIM32在其他病毒中的广谱抗病毒功能及其在猪水疱性疾病防控中的应用潜力。