超生理剂量雌二醇状态对IVF-ET周期阴道微生物群的影响及其与生殖结局的关联研究

本研究针对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)过程中超生理剂量雌二醇(E2)环境对阴道微生物群的影响机制展开探索。浙江大学医学院附属妇产科医院团队通过16S rRNA测序技术，首次揭示了中国不孕女性在卵巢刺激或外源性雌激素补充导致的超生理E2状态下，阴道微生物α多样性降低、群落状态类型(CSTs)向乳酸杆菌优势型转变的特征。研究发现链球菌(Streptococcus)丰度与E2水平呈正相关，且与不良妊娠结局显著相关，为优化辅助生殖技术提供了新的微生物标志物。

　　

在辅助生殖技术领域，体外受精-胚胎移植(IVF-ET)过程中产生的超生理剂量雌二醇(E₂)环境一直备受关注。这种异常激素状态可能源于两个途径：控制性卵巢刺激(COS)导致的多卵泡发育，使E₂浓度达到生理水平的10-20倍；或冻融胚胎移植(FET)周期中为子宫内膜准备而补充的外源性雌激素。尽管既往研究已发现过高E₂水平可能对妊娠结局产生不利影响，但其是否通过干扰阴道微生物群发挥作用仍属未知领域。

浙江大学医学院附属妇产科医院生殖内分泌科的研究团队针对这一科学问题展开了深入研究。通过前瞻性队列设计，研究人员采集了92例接受新鲜或冻融胚胎移植患者的阴道样本，运用16S rRNA高通量测序技术，系统分析了不同E₂水平下阴道微生物组的特征变化。研究创新性地将新鲜胚胎移植患者按触发日E₂峰值分为高(E₂>11,000 pmol/L)、中(5,000-11,000 pmol/L)、低(E₂<5,000 pmol/L)三组，冻融胚胎移植患者则分为自然周期组和激素替代周期组，建立了完善的比较研究体系。

关键技术方法包括：1)采用GnRH拮抗剂方案进行标准化卵巢刺激；2)通过无菌拭子采集阴道上1/3和后穹窿样本；3)应用DP302基因组DNA提取试剂盒提取总DNA；4)使用341F/805R通用引物进行PCR扩增；5)基于Illumina NovaSeq 6000平台进行双端250 bp测序；6)采用QIIME2和LEfSe等生物信息学工具分析微生物组数据。

【Diversity and composition of vaginal microbial community】

研究发现随着E₂水平升高，阴道微生物α多样性显著降低。PCoA分析显示低E₂组与激素替代组的β多样性差异显著。在门水平上，厚壁菌门(Bacillota)比例随E₂升高而增加，变形菌门(Pseudomonadota)则在低E₂组更丰富。属水平上，乳酸杆菌(Lactobacillus)在高E₂组占比达68.93%，显著高于低E₂组的53.04%。

【The distribution of microbial communities】

研究观察到中国不孕女性的阴道CSTs分布与Ravel报道的健康亚洲女性存在差异。在生理E₂状态下，自然周期组CST IV(厌氧菌优势型)比例较高，而超生理E₂促使CST分布向CST III(乳酸杆菌优势型)转变，更接近亚洲女性典型模式。

【Pregnancy outcomes】

尽管高E₂组表现出更明显的乳酸杆菌优势，但其持续妊娠率(72%)反而低于自然周期组(93.3%)。链球菌(Streptococcus)丰度与E₂水平呈正相关(r=0.232,p=0.026)，且在未妊娠组显著升高。

【Analysis of the vaginal microbiota in relation to pregnancy outcomes】

LEfSe分析鉴定出多个与不良结局相关的生物标志物：链球菌预测非持续妊娠的AUC达0.758；奇异菌(Atopobium)与早期流产相关(AUC=0.899)；双歧杆菌(Bifidobacterium)则与生化妊娠相关。

结论部分强调，超生理E₂状态虽能促使阴道微生物组向乳酸杆菌优势型转变，但并未改善生殖结局。链球菌可能作为E₂介导的微生物效应物影响妊娠成功率。该研究为优化辅助生殖技术方案提供了重要依据：在追求卵泡发育的同时，需关注E₂水平对阴道微生态的扰动，而链球菌等微生物标志物有望成为预测妊娠结局的新指标。研究成果发表于《BMC Microbiology》，为生殖医学与微生物组的交叉研究开辟了新视角。