乳腺癌通过DMBT1诱导CD62L+ Kupffer细胞促进中性粒细胞胞外诱捕网形成和肝转移的机制研究

本研究揭示了乳腺癌肝转移的独特机制——肿瘤分泌DMBT1蛋白通过结合Kupffer细胞(KCs)表面MUC1受体，激活NF-κB信号诱导CD62L+ KC亚群，后者分泌CCL8通过CCR1/ERK通路触发中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)形成，促进转移灶定植。研究开发了DMBT1中和抗体3H11，为肝转移治疗提供新策略。

　　

肝脏作为乳腺癌最常见的远处转移靶器官，其转移机制长期未明。临床数据显示，乳腺癌肝转移患者往往失去手术机会，系统性治疗选择也十分有限。近年研究发现，中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在肿瘤转移中发挥关键作用，但为何NETs在肝转移灶中特别丰富？这个现象背后的器官特异性调控机制成为领域内亟待破解的科学谜题。

中国科学院上海营养与健康研究所的研究团队在《Cell Discovery》发表的重要研究，首次揭示了乳腺癌细胞通过分泌蛋白DMBT1"驯化"肝脏Kupffer细胞(KCs)，形成独特的CD62L⁺ KC亚群，进而激活中性粒细胞NETosis促进肝转移的分子机制。研究通过临床样本分析、小鼠模型构建、单细胞转录组测序(scRNA-seq)等技术，结合条件培养基处理、受体阻断实验等系列方法，系统阐明了从肿瘤分泌信号到微环境重塑的全链条机制。

研究首先在齐鲁医院乳腺癌队列中发现，肝转移灶中NETs标志物(MPO/Ci-H3)显著多于其他转移部位。通过体内筛选获得高肝转移性MDA-MB-231亚系LvM16，证实其特异诱导肝脏NETs形成。单细胞测序揭示LvM16诱导出独特的CD62L⁺ KC亚群(Cluster 6)，该亚群高表达趋化因子CCL8。机制研究发现，肿瘤分泌的DMBT1结合KC表面MUC1-C，激活NF-κB信号上调CD62L和CCL8表达；CCL8通过中性粒细胞表面CCR1受体激活ERK信号，诱导组蛋白瓜氨酸化和NETs形成。研究开发的DMBT1中和抗体3H11能有效阻断这一通路，抑制肝转移。

研究的关键技术路线包括：1) 建立人源和小鼠乳腺癌肝转移模型(原位/脾内注射)；2) 临床样本多色免疫荧光分析；3) 肝脏免疫细胞单细胞转录组测序；4) 条件培养基处理与中性粒细胞NETosis检测；5) DMBT1-MUC1相互作用验证(Co-IP)；6) 中和抗体开发与药效评价。齐鲁医院乳腺癌队列(n=65)和UNC公共数据集(n=220)为临床相关性分析提供支持。

【NETs在肝转移灶中特异性富集】临床样本显示肝转移灶NETs密度是肺转移的3.2倍(P<0.001)。小鼠模型中，NETs抑制剂GSK484使肝转移负荷降低67%(P<0.01)，生存期延长40%。

【CD62L⁺ KC亚群的发现】scRNA-seq鉴定出10个巨噬细胞亚群，其中Cluster 6特异性高表达Cd62l(5.8倍于其他亚群,P<0.001)。流式证实LvM16使CD62L⁺ KC比例从4.3%增至21.7%。

【CCL8-CCR1-ERK信号轴】重组CCL8(10 ng/mL)诱导NETs效率与PMA相当。CCR1拮抗剂BX471可阻断CCL8诱导的ERK磷酸化(抑制率82%)和NETosis。

【DMBT1-MUC1-NF-κB通路】DMBT1过表达使MCF7肝转移灶增加3.5倍(P<0.001)。Co-IP证实DMBT1与MUC1-C直接结合，ChIP-qPCR显示p65结合Ccl8启动子。NF-κB抑制剂JSH-23使CCL8分泌减少74%。

【治疗转化】DMBT1中和抗体3H11使Py8119模型肝转移结节减少61%(P<0.01)，且无显著毒性。MUC1抑制剂GO203虽有效但引起明显体重下降(18%)。

这项研究的重要意义在于：1) 首次揭示CD62L⁺ KC亚群在肝转移中的关键作用，丰富了肿瘤相关巨噬细胞(TAM)异质性的认知；2) 阐明DMBT1-MUC1-NF-κB-CCL8信号轴的空间调控机制，解释NETs的肝脏特异性富集现象；3) 开发具有转化潜力的DMBT1靶向治疗策略。研究为理解器官特异性转移提供新范式，3H11抗体有望成为首个针对肿瘤-KC相互作用的治疗药物。未来研究可进一步探索DMBT1在乳腺癌肝转移早期诊断中的价值，以及联合NETs抑制剂的治疗方案优化。