肝祖细胞外泌体携带JAG1通过激活Notch信号通路促进PVL大鼠肝脏再生的机制研究

本研究针对门静脉结扎(PVL)后肝脏再生机制不明确的问题，通过系统研究揭示了肝祖细胞(LPCs)来源的外泌体通过SEC31A/ALG-2/Alix轴分选JAG1蛋白，激活Notch信号通路促进肝脏再生的新机制。研究人员发现YAP诱导肝细胞重编程为Sox9+ LPCs，并通过外泌体介导的细胞间通讯激活邻近细胞的Notch信号，为肝脏再生治疗提供了新靶点。

　　

肝脏作为人体重要的代谢和解毒器官，具有惊人的再生能力。然而在临床实践中，肝脏切除术后残余肝体积不足仍是导致肝功能衰竭的主要因素。门静脉栓塞(PVE)和门静脉结扎(PVL)作为增加残余肝体积的临床技术已应用30余年，但其促进肝脏再生的分子机制尚未完全阐明。特别是近年来发现，细胞外囊泡(EVs)在组织稳态维持和疾病发展中起关键作用，但外泌体在PVL后肝脏再生中的具体作用机制仍存在知识空白。

海军军医大学的研究团队在《Cell Death and Disease》发表的研究，首次揭示了肝祖细胞(LPCs)来源的外泌体通过携带Notch配体JAG1激活信号通路促进肝脏再生的分子机制。研究发现YAP-Sox9⁺ LPCs是JAG1⁺外泌体的重要来源，并通过SEC31A/ALG-2/Alix轴完成JAG1的分选和分泌，为肝脏再生治疗提供了新的理论基础和潜在靶点。

研究采用门静脉结扎大鼠模型，运用超速离心法分离外泌体，通过透射电镜(TEM)和纳米颗粒追踪分析(NTA)进行表征。采用Co-IP-MS技术鉴定JAG1相互作用蛋白，结合免疫荧光(IF)和Western blot(WB)分析信号通路激活情况。通过JAG1抗体阻断实验验证外泌体功能，并利用TRULI和Verteporfin调控YAP活性研究其对LPCs形成的影响。

PVL手术评估及外泌体鉴定

研究首先建立PVL大鼠模型，发现术后24小时肝组织中外泌体标志蛋白CD63和Alix表达显著升高。透射电镜显示提取的外泌体呈典型杯状结构，粒径分析显示主要分布在50-200nm。

肝组织外泌体激活YAP-Notch信号促进再生

实验证实PVL后肥大部分肝组织外泌体可显著上调受体细胞中JAG1、Notch1、NICD和YAP等蛋白表达。体内实验显示外泌体处理组Ki67⁺增殖细胞数明显增加，表明其促进肝细胞增殖作用。

外泌体携带JAG1激活Notch信号

研究发现肥大部分肝组织外泌体中JAG1蛋白在术后24小时达峰值。通过JAG1抗体阻断实验证实，阻断后外泌体促增殖作用显著减弱，下游信号蛋白NICD、Sox9和Hes1表达降低。

ALG-2促进JAG1分选至外泌体

Co-IP-MS鉴定出SEC31A、ALG-2和Alix是JAG1关键相互作用蛋白。机制研究表明ALG-2作为桥梁分子连接SEC31A和Alix，形成SEC31A/ALG-2/Alix轴调控JAG1的外泌体分选。

YAP诱导LPCs产生JAG1⁺外泌体

研究发现YAP激活可诱导肝细胞重编程为Sox9⁺HNF4α⁺ LPCs，并通过上述分子轴促进JAG1⁺外泌体释放。这些外泌体可激活邻近细胞Notch信号，形成正反馈环路促进再生。

该研究首次系统阐明了PVL后肝脏再生的外泌体调控机制，发现YAP-Sox9⁺ LPCs是JAG1⁺外泌体的重要来源，并解析了SEC31A/ALG-2/Alix轴介导的JAG1分选机制。这些发现不仅丰富了肝脏再生的理论基础，也为开发基于外泌体的肝脏再生治疗策略提供了新思路。特别是针对肝切除术后肝功能恢复、肝衰竭治疗等临床问题，该研究提出的分子机制和靶点具有重要的转化医学价值。