牛病毒性腹泻病毒B3株灭活疫苗激发强效特异性体液与细胞免疫应答的研究

本研究成功开发了基于新疆地区分离的牛病毒性腹泻病毒（BVDV）B3株的灭活疫苗，通过小鼠模型证实其可诱导显著高于商业疫苗的γ-干扰素（IFN-γ）分泌和中和抗体水平（p<0.0001），并有效降低多组织病毒载量。该疫苗兼具Th1/Th2免疫平衡特性，为新疆牧区BVDV防控提供了本土化解决方案。

　　

引言

牛病毒性腹泻-黏膜病（BVD-MD）是由牛病毒性腹泻病毒（BVDV）引发的全球性牛业重要传染病。新疆作为中国主要牧区，受BVDV-1（B1）、BVDV-2（B2）及本土分离株XJ-BVDV-3（B3）和BVDV-LC（LC）的多重威胁。鉴于BVDV高遗传变异性，开发针对流行株的交叉保护疫苗成为当务之急。

材料与方法

研究采用3%过氧化氢（H₂O₂）灭活四株病毒（抗原量10^7.5 TCID₅₀/mL），弗氏佐剂乳化后免疫BALB/c小鼠。通过ELISpot检测IFN-γ分泌，ELISA分析IgG亚类，病毒中和试验（VNT）评估抗体效价，攻毒后采用RT-qPCR定量组织病毒载量。

结果

病毒灭活与疫苗特性

间接免疫荧光（IFA）和RT-PCR证实完全灭活。疫苗呈现乳白色、粘度适宜且无菌，符合临床前研究标准。

细胞免疫应答

B1和B3组IFN-γ分泌显著高于商业疫苗组（p<0.0001），且随时间递增。B3组在42天时IFN-γ阳性斑点数达峰值，显示持续Th1型免疫优势。

体液免疫特征

所有疫苗均诱导特异性IgG/IgG1/IgG2a。B3组呈现动态免疫转换：初期（7天）以Th2为主（IgG2a/IgG1<1），14天后转为Th1优势（比值>1）。商业疫苗则呈现相反趋势。

中和保护效应

B3和LC组42天时中和抗体效价显著超越商业疫苗（p<0.05）。攻毒实验显示，B3组肾脏病毒载量较商业疫苗降低82%（p<0.01），肝脏、肺等组织保护率达75%以上。

讨论

B3灭活疫苗的双重免疫优势可能源于其独特抗原结构：E2蛋白构象表位促进中和抗体，而NS3蛋白激发CTL反应。相较于商业疫苗（仅含BVDV-1a株），本土B3株对新疆流行株的抗原匹配度更高，解释其卓越的交叉保护性。

小鼠模型虽证实免疫原性，但需注意种属差异：牛类CD4⁺ T细胞亚群分布与细胞因子谱可能影响疫苗最终效力。

结论

B3灭活疫苗在小鼠模型中展现出商业化潜力，其"双阶段"免疫转换机制（Th2→Th1）与多组织保护效应为牧区防控提供新策略。后续需开展牛体试验验证剂量效应，并优化佐剂配方以延长抗体持续时间。