基于重组Ol-BTSP蛋白的间接ELISA法在羊群中监测拉合尔钝缘蜱暴露的研发与现场验证

为解决拉合尔钝缘蜱（Ornithodoros lahorensis）传播疾病监测难题，中国检验检疫科学研究院团队开发了基于重组Ol-BTSP蛋白的羊用间接ELISA（S-iELISA）检测法。该技术灵敏度达93.3%（95% CI: 70.2–99.7%），特异性96.7%（95% CI: 82.8–99.9%），成功应用于新疆（10.45%）和内蒙古（3.09%）455份羊血清检测，为蜱传疾病防控提供了新型血清学工具。

　　

蜱虫虽小，危害却大。作为多种人畜共患病的传播媒介，拉合尔钝缘蜱（Ornithodoros lahorensis）的监测一直是防控相关疾病的关键环节。然而传统直接监测方法效率低下，难以大规模应用。更棘手的是，不同蜱种间的唾液蛋白高度相似，如何找到特异性标志物成为技术突破的瓶颈。中国检验检疫科学研究院/国家市场监督管理总局动植物检疫安全技术创新中心的徐晓林（Xiaolin Xu）团队另辟蹊径，将目光投向蜱虫唾液中的关键蛋白——BTSP（Tick salivary protein），试图通过血清学检测破解这一难题。

研究人员采用重组蛋白表达技术获得rOl-BTSP，通过Western blot验证其特异性后，建立优化了羊用间接ELISA（S-iELISA）检测体系。关键技术包括：重组蛋白表达纯化、序列同源性分析（ClustalW）、Western blot验证、ELISA条件优化（棋盘滴定法确定最佳抗原包被浓度1μg/mL和血清稀释度1:100），以及455份现场样本（新疆273份、内蒙古182份）检测验证。

【背景】研究证实蜱唾液蛋白可作为叮咬标记物，但拉合尔钝缘蜱特异性标志物尚未明确。序列分析显示Ol-BTSP与硬蜱、软蜱同源蛋白仅30.5%氨基酸相似性，预示其可能具备种属特异性。

【方法】通过大肠杆菌表达系统获得可溶性rOl-BTSP，小鼠模型证实其能被蜱咬血清特异性识别。建立的S-iELISA在ROC曲线分析中AUC达0.983，cut-off值设定为0.316时，对阴性样本的符合率达96.7%。

【结果】现场检测揭示显著地域差异：新疆羊群阳性率（10.45%）是内蒙古（3.09%）的3.4倍，这与两地生态环境差异高度吻合。交叉实验显示，该检测法对其他常见蜱种（如长角血蜱、草原革蜱）血清均无交叉反应。

【结论】该研究首次证实rOl-BTSP可作为拉合尔钝缘蜱暴露的特异性标记物，建立的S-iELISA具有操作简便（3小时出结果）、成本低廉（每板可测88样本）等优势。发表于《Veterinary Parasitology: Regional Studies and Reports》的这项成果，不仅填补了软蜱血清学检测的技术空白，更通过标准化检测流程（包含内部质控血清）为蜱传疾病的风险评估提供了可推广的技术方案。特别值得注意的是，3.09-10.45%的阳性率提示我国牧区存在未被充分认知的蜱媒病传播风险，这项技术将显著提升边境地区动物检疫的预警能力。