法医体液鉴定三重RT-qPCR检测系统的建立与应用研究

本文推荐：本研究创新性地建立了三重逆转录定量PCR（RT-qPCR）检测系统，可同步检测miR-451a、miR-203a-3p等6种法医体液特异性microRNA（miRNA）标志物。通过优化引物探针浓度和退火温度，该系统在保持单重检测灵敏度的同时，显著提升痕量体液鉴定的通量和效率，并构建基于核密度估计（KDE）的预测模型，为犯罪现场微量生物物证鉴定提供新工具。

　　

Highlight

本研究成功开发了一种三重RT-qPCR（逆转录定量聚合酶链式反应）检测系统，可同时分析三种microRNA（miRNA）分子，显著提升法医体液鉴定的效率和准确性。

样本制备

共采集中国北方地区25-35岁志愿者210份样本，包括外周血（PB）、月经血（MB）、唾液（SA）、精液（SE）和阴道分泌物（VA）各42份。所有样本均按标准化流程采集：外周血采用EDTA抗凝管保存；唾液样本要求志愿者空腹1小时后采集；精液样本需禁欲2天后通过无菌广口杯收集。

RT反应优化

对比单重与同步逆转录6种miRNA的效果差异发现，两种方法的检测数据变异系数（CV）均低于5%（附表S2）。扩增曲线显示，所有标志物在同步逆转录条件下均可达到与单重检测相当的荧光平台期（图1），证明同步逆转录完全可行。

讨论

随着分子生物学技术进步，多重qPCR（定量PCR）已成为核酸定量检测的核心技术。本研究通过优化引物探针组合，使单次反应可检测多个分子标志物，不仅降低60%的实验成本，还将检测周期缩短至原时间的1/3。特别值得注意的是，该系统对犯罪现场常见的混合体液污染表现出优异抗干扰能力。

结论

该三重RT-qPCR系统成功解决了法医实践中"痕量样本多次检测需求与样本量不足"的矛盾。结合核密度估计（KDE）构建的预测模型，对模拟样本和真实样本的识别准确率均超过95%，为法医DNA鉴定领域提供了创新性解决方案。