单细胞分辨率解析产科抗磷脂综合征中蜕膜单核细胞来源巨噬细胞浸润的作用与机制

这篇研究通过构建OAPS（产科抗磷脂综合征）患者蜕膜与外周血单核细胞（PBMCs）的单细胞图谱，揭示了aPLs（抗磷脂抗体）通过TLR4-NF-κB通路驱动蜕膜巨噬细胞分泌CCL2，招募CCR2+单核细胞来源巨噬细胞（MDMs）浸润，导致炎症和滋养细胞功能障碍。靶向CCR2和TLR4可改善小鼠模型妊娠结局，为OAPS治疗提供新策略。

　　

引言

产科抗磷脂综合征（OAPS）是一种以病理妊娠和抗磷脂抗体（aPLs）持续阳性为特征的自身免疫性疾病。传统观点认为其发病机制与母胎界面微血栓形成有关，但近年研究发现胎盘血栓病变并不常见。蜕膜免疫细胞（如NK细胞、巨噬细胞和T细胞）通过与滋养细胞相互作用维持妊娠耐受，而OAPS患者蜕膜巨噬细胞显著浸润的现象提示其可能成为新的病理特征。然而，这些巨噬细胞的来源、调控机制及对滋养细胞的影响尚不明确。

结果

1. 蜕膜与PBMCs的单细胞整合图谱

研究构建了OAPS患者和健康对照（HCs）的蜕膜与PBMCs单细胞转录组图谱，通过Harmony算法校正批次效应后，鉴定出20种细胞类型。结果显示，蜕膜免疫细胞更倾向于参与血管生成和免疫调节，而外周免疫细胞则高表达炎症和防御相关基因。OAPS患者PBMCs中单核细胞比例显著降低，而T细胞比例升高，且CD4⁺/CD8⁺比值降低与胚胎死亡相关。

2. 蜕膜MDMs的致病作用

单细胞数据揭示OAPS患者蜕膜中单核细胞来源巨噬细胞（MDMs）比例增加，流式细胞术（FCM）验证其表面标志CCR2表达升高。透射电镜显示CCR2⁺ MDMs伪足和细胞器较少，而CCR2^?组织驻留巨噬细胞（TRMs）具有更强的吞噬活性。功能分析表明，MDMs高表达IL1B、TNF等促炎因子，并通过NF-κB通路激活炎症反应；其条件培养基显著抑制滋养细胞系HTR-8/SVneo的增殖和侵袭能力，促进凋亡。

3. CCL2驱动的MDMs浸润机制

免疫组化显示OAPS蜕膜中CCL2表达升高，且主要由巨噬细胞分泌。aPL-IgG/β₂GPI复合物通过TLR4-NF-κB通路刺激巨噬细胞产生CCL2。血管内皮细胞（ECs）表面ACKR1表达增加，介导CCL2聚集，促进CCR2⁺单核细胞趋化。在OAPS小鼠模型中，CCR2拮抗剂PF-4136309和TLR4抑制剂TAK-242均能减少蜕膜MDMs浸润并改善妊娠结局。

4. 炎症因子正反馈环路

OAPS蜕膜中IFN-γ和TNF-α水平升高，进一步诱导ECs表达ACKR1，形成“CCL2-CCR2-MDMs-炎症因子”的正反馈环路。体外实验证实，TNF-α和IFN-γ剂量依赖性上调EA.hy926细胞中ACKR1的表达，增强CCL2的趋化作用。

讨论

本研究首次系统阐明了OAPS患者外周与蜕膜免疫细胞的关联，提出MDMs浸润是导致妊娠失败的关键机制。靶向CCL2/CCR2轴或TLR4通路可能成为治疗难治性OAPS的新策略。局限性在于样本量较小，且需进一步验证CCL2对巨噬细胞功能的直接调控作用。未来可通过临床前研究优化药物递送系统，如纳米材料包载小分子抑制剂，以降低全身副作用。

实验方法

研究采用单细胞RNA测序（scRNA-seq）、流式细胞分选、免疫荧光、Western blot等技术，结合OAPS小鼠模型（aPL-IgG诱导）和体外细胞实验（THP-1、HTR-8/SVneo、EA.hy926细胞系），全面解析了MDMs的致病机制。临床样本来自四川大学华西第二医院，经伦理委员会批准（批号2024-034）。