Wnt通路与功能信号在灰马黑色素瘤中的定量蛋白质组学与免疫组化研究

本研究针对灰马高发的黑色素瘤(EMN)，通过LC-MS/MS蛋白质组学分析19例组织样本（正常6例/早期7例/晚期6例），鉴定出12,310种蛋白质。研究发现早期EMN中Wnt通路关键蛋白（Wnt2B/Wnt5B）显著过表达，并通过免疫组化(IHC)验证Wnt2B的功能信号。该成果为EMN早期诊断提供新靶点，发表于《BMC Veterinary Research》。

　　

灰马黑色素瘤(EMN)是兽医临床常见的皮肤肿瘤，80%的15岁以上灰马会患病，但其分子机制长期不明。这类肿瘤虽生长缓慢、转移率低，却严重影响马匹健康。既往研究发现灰马毛色基因STX17和ASIP异常可能与肿瘤相关，但驱动EMN发生发展的关键信号通路仍待揭示。

为解决这一科学问题，泰国曼谷皇家骑警分队与玛希隆大学的研究团队开展了一项创新研究。他们采集19匹灰马尾部组织（正常6例/早期EMN7例/晚期EMN6例），通过定量蛋白质组学和免疫组化技术，首次系统描绘了EMN的分子特征。论文发表于《BMC Veterinary Research》，为理解EMN发病机制提供了重要线索。

研究采用三大关键技术：1）LC-MS/MS质谱分析鉴定差异蛋白；2）KEGG数据库进行功能注释；3）免疫组化验证Wnt2B定位。样本来自不同品种灰马（杂交种7例/阿拉伯马3例等），通过活检获取组织后分为两组，分别用于蛋白质组学和免疫组化分析。

组织蛋白质组特征

通过LC-MS/MS共鉴定12,310种蛋白质，按KEGG分类显示环境信息处理(28%)和代谢相关(18%)蛋白占比最高。早期与晚期EMN比较发现：碳水化合物代谢蛋白如PFKP和PGD在肿瘤组显著升高，提示糖代谢重编程是EMN重要特征。

差异表达蛋白分析

筛选出59个早期EMN特征蛋白和143个晚期特征蛋白。其中6-磷酸果糖激酶(PFKP)和6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶(PGD)在肿瘤组持续高表达，通过STRING数据库预测二者与黑色素瘤抗原MAGED2存在相互作用，构成EMN特有的代谢网络。

Wnt通路关键作用

早期EMN中Wnt家族蛋白表达显著异常：经典通路Wnt2B和非经典通路Wnt5B均过表达。免疫组化显示Wnt2B在早期EMN的H-score达140.82±49.58，显著高于正常组(27.28±16.25)。进一步分析发现Wnt2B通过β-catenin依赖途径促进增殖，而Wnt5B可能通过Rho/ROCK1通路影响细胞迁移。

讨论与意义

该研究首次揭示Wnt通路在EMN早期激活的特征：1）经典与非经典Wnt协同作用；2）代谢酶PFKP/PGD与Wnt蛋白形成功能网络；3）Wnt2B可作为早期诊断标志物。这些发现不仅解释了灰马黑色素瘤生长缓慢但持续进展的分子基础，还为开发靶向治疗策略提供了新方向。研究局限性在于样本量较小，未来需通过功能实验验证Wnt通路的具体调控机制。

这项由玛希隆大学团队完成的研究，通过多组学方法填补了EMN分子机制的空白，其发现可能对理解人类黑色素瘤的物种差异也有启示意义。特别是Wnt2B在早期EMN的特异性表达，为临床诊断提供了潜在的新靶点。