BCL-2抑制剂通过调控T细胞糖酵解影响急性髓系白血病（AML）中T细胞数量、功能及抗肿瘤免疫的机制研究

本研究揭示BCL-2抑制剂Venetoclax（VEN）通过双重机制治疗急性髓系白血病（AML）——直接诱导AML细胞凋亡的同时，独特地调节T细胞糖酵解代谢，显著增强CD4+/CD8+ T细胞的活化状态（CD25+/CD38+）、记忆亚群（CD45RO+）比例及效应分子（IFN-γ/Perforin/Granzyme B）分泌，为靶向药物联合免疫治疗提供新策略。

　　

BCL-2抑制剂调控AML免疫微环境的新机制

3.1 VEN促进AML细胞凋亡

临床数据分析显示，接受VEN联合去甲基化药物（HMA）治疗的AML患者骨髓原始细胞比例和微小残留病（MRD）水平显著降低，同时外周血红细胞（RBC）、血红蛋白（HGB）和血小板（PLT）明显回升。体外实验证实VEN对THP-1和HL-60细胞系具有时间-浓度依赖性杀伤作用，IC₅₀值随作用时间延长而降低。动物模型中，VEN治疗组小鼠皮下肿瘤体积缩小，外周血CD45⁺/CD34⁺白血病细胞比例显著下降。Western blot（WB）检测发现VEN上调BCL-xL和MCL-1表达的同时，激活了BAX-caspase3/7凋亡通路。

3.2 VEN调节AML免疫微环境

临床队列分析揭示VEN+HMA治疗显著改变淋巴细胞亚群比例：总T细胞（CD3⁺）和CD8⁺ T细胞分别增加47.1%和38.2%，NK细胞（CD16⁺CD56⁺）上升29.4%，而B细胞（CD19⁺）下降33.3%。细胞因子检测显示治疗组外周血IFN-γ水平提升2.1倍，IL-17呈现下降趋势。这些变化在HMA单药对照组中未观察到，提示VEN是免疫调节的主要效应成分。

3.3 T细胞对VEN的凋亡抵抗

CCK-8和Calcein-AM/PI双染实验证实，相同浓度VEN（2μM）处理24小时后，THP-1细胞凋亡率达63.5±5.2%，而CD4⁺/CD8⁺ T细胞存活率保持在92%以上。机制研究发现T细胞高表达BCL-xL（3.2倍）和MCL-1（2.8倍）但低表达BCL-2（仅AML细胞的1/5），这种独特的抗凋亡蛋白谱系是其抵抗VEN的关键。PBMC人源化AML小鼠模型进一步验证VEN治疗组外周血T细胞比例较对照组提高1.7倍。

3.4-3.8 T细胞功能调控的多维证据

VEN处理后的T细胞呈现"代谢-功能"双重重塑：

1）分泌谱改变：CD8⁺ T细胞TNF-α分泌增加2.3倍，Perforin和Granzyme B分别升高1.8和1.5倍

2）免疫检查点上调：PD-1表达量呈浓度依赖性增加，最高达对照组的3.2倍

3）活化标志变化：CD25⁺和CD38⁺ T细胞比例分别增加41.5%和33.7%

4）亚群重分布：记忆T细胞（CD45RO⁺）比例提升至58.3%，而初始T细胞（CD45RA⁺）下降至31.2%

3.9 协同抗肿瘤效应验证

Transwell共培养实验显示，经VEN预处理的CD8⁺ T细胞对THP-1细胞的杀伤效率提高2.1倍（p<0.001）。PBMC人源化AML小鼠模型中，VEN+PBMC联合组肿瘤体积最小（较对照组减少78.5%），外周血CD34⁺白血病细胞仅存12.3%，显著优于单药组。

3.10 糖酵解调控的核心机制

DIA蛋白质组学发现VEN处理后T细胞中355个差异表达蛋白，其中糖酵解关键酶ALDOA表达上调3.1倍（排名差异蛋白第3位）。qRT-PCR和WB验证ALDOA在mRNA和蛋白水平均显著增加。进一步检测显示己糖激酶2（HK2）、磷酸果糖激酶（PFKP）和丙酮酸激酶（PKM2）表达上调，细胞内丙酮酸含量增加1.9倍。免疫组化（IHC）显示VEN组小鼠脾脏ALDOA染色强度较对照增强2.4倍。

该研究首次阐明VEN通过"代谢重编程"机制增强T细胞抗AML免疫：低剂量VEN（1-2μM）虽不足以直接杀伤T细胞，但通过激活糖酵解通路促进T细胞活化和效应功能，这种"间接免疫激活"与"直接肿瘤杀伤"的双重作用为优化VEN临床用药方案提供了重要依据。值得注意的是，VEN同时诱导PD-1上调的副作用提示联合PD-1抑制剂可能是突破治疗瓶颈的新方向。