CRISPR/Cas9靶向EphA2揭示EphA2-CDH1调控轴在去势抵抗性前列腺癌迁移中的新机制

为解决去势抵抗性前列腺癌(CRPC)迁移机制不明的问题，研究人员通过CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向EphA2受体酪氨酸激酶，发现EphA2通过下调CDH1（E-cadherin）促进CRPC细胞迁移，临床分析显示EphA2高表达联合Gleason评分可显著提升淋巴结转移预测效能（AUC=0.735），为CRPC治疗提供新靶点。

　　

前列腺癌是男性最常见的恶性肿瘤之一，而进展为去势抵抗性前列腺癌(CRPC)后往往伴随高转移风险，成为临床治疗的主要挑战。尽管已有研究表明酪氨酸激酶受体EphA2在多种癌症中高表达，但其在CRPC中的具体作用机制仍不明确。传统研究方法如siRNA干扰存在基因沉默不稳定的局限，且缺乏系统性机制探索。针对这一科学问题，界首市人民医院放射科的研究团队在《Biocatalysis and Agricultural Biotechnology》发表论文，通过创新性应用CRISPR/Cas9基因编辑技术，首次揭示了EphA2-CDH1调控轴在CRPC迁移中的关键作用。

研究团队采用CRISPR/Cas9基因编辑构建EphA2敲除(KD)的PC3和DU145细胞系，通过转录组测序筛选差异基因，结合TCGA数据库临床数据分析。主要技术包括：1) 基于大肠杆菌蓝白斑筛选优化sgRNA；2) 慢病毒载体构建稳定转染细胞系；3) 伤口愈合和Transwell迁移实验；4) 生物信息学分析477例前列腺癌患者临床数据。

3.1 CRISPR/Cas9诱导EphA2基因特异性突变

通过白蓝菌落筛选获得编辑效率达77.8%的sgRNA-1，Western blot证实EphA2蛋白表达显著降低。

3.2 EphA2对CRPC细胞生物学功能的影响

EphA2-KD使PC3和DU145细胞迁移率下降50%以上，但增殖和凋亡无显著变化；过表达EphA2则使DU145细胞迁移增强1.8倍。

3.3 CDH1被鉴定为EphA2下游靶点

转录组分析发现18个差异基因，验证显示CDH1在EphA2-KD细胞中表达上调2.1倍，在过表达细胞中下调60%，提示其受EphA2负调控。

3.4 EphA2-CDH1轴的临床相关性

TCGA数据分析显示，EphA2高表达且CDH1低表达患者淋巴结转移风险增加3倍，联合Gleason评分可使淋巴结转移预测敏感性从44.8%提升至72.9%。

该研究首次证实CRISPR/Cas9靶向EphA2能通过上调CDH1抑制CRPC迁移，突破性地提出EphA2可作为独立于Gleason评分的淋巴结转移预测标志物。尽管缺乏体内实验，但研究通过多组学分析揭示了EphA2-CDH1这一全新调控轴，为开发小分子抑制剂联合现有疗法提供理论依据。值得注意的是，不同sgRNA编辑效率差异达10倍的现象，也提示未来研究需优化基因编辑策略。这些发现不仅为CRPC精准诊疗提供新思路，也为其他Eph受体家族相关肿瘤研究提供方法学参考。