综述：甲基乙二醛解毒在结核分枝杆菌适应性与致病中的作用

本综述创新性地将多酶等温快速扩增技术(MIRA)与激烈火球菌Argonaute(PfAgo)基因编辑系统相结合，开发出具有荧光检测(FBDA)和肉眼观察(NEO)双模式的疟原虫即时检测(POCT)新方法。该技术突破传统显微镜和PCR在资源匮乏地区的应用限制，实现102 copies/μL的高灵敏度检测，为P. falciparum的现场筛查提供创新解决方案。

　　

Abstract

疟疾仍是全球重大公共卫生挑战，尤其在撒哈拉以南非洲等热带地区。恶性疟原虫(P. falciparum)引起的疟疾致死率最高，亟需发展适用于资源有限地区的快速诊断技术。本研究基于18S rRNA基因设计特异性引物，建立MIRA-PfAgo双重检测体系，在38°C/25分钟完成等温扩增后，通过95°C/30分钟PfAgo切割反应，实现荧光定量与肉眼判读双模式输出。

Introduction

疟疾与艾滋病、结核病并称全球三大公共卫生威胁。传统镜检依赖专业人员且灵敏度有限，RDTs难以检测低密度感染，而PCR需要复杂设备。新兴的CRISPR/Cas和Argonaute基因编辑技术为POCT带来突破可能。PfAgo作为核酸切割酶，其向导DNA(gDNA)引导的特异性识别机制为病原检测提供新思路。

Principle and workflow

技术流程包含三个关键步骤：Chelex-100法快速提取DNA→MIRA等温扩增→PfAgo切割荧光报告分子。当存在靶序列时，PfAgo-gDNA复合物精确切割ssDNA报告基团，释放荧光信号。优化后的体系对重组质粒检测限达100拷贝/μL，临床验证显示FBDA模式灵敏度96.15%，特异性100%。

Discussion

相比需要热循环仪的qPCR，本技术仅需恒温装置即可完成扩增与检测。NEO模式通过紫外灯直接观察荧光，更适合电力短缺地区。值得注意的是，PfAgo在95°C仍保持活性的特性，使其比37°C工作的CRISPR/Cas12a更适应野外环境。

Conclusions

该研究首次将MIRA与PfAgo联用，建立兼具实验室精度和现场适用性的疟疾诊断平台。未来通过冻干试剂开发和便携式读数设备集成，可进一步推动该技术在疟疾流行区的实际应用。