优化监控：通过实时PCR技术对牛α疱疹病毒1型进行混合样本检测的可行性

《VirusDisease》：Optimizing surveillance: feasibility of pooled sample testing for bovine alphaherpesvirus 1 detection by real-time PCR

本研究评估了 pooled sample testing（PST）检测牛嗜血支原体1型（BoAHV-1）的可行性和成本效益，采用五样本混合检测并优化DNA提取和PCR反应体积，结果显示PST的总体阳性率（2.86%）与个体检测（2.80%）接近，验证了其在动物监测中的应用潜力。

　　

摘要

本研究旨在评估混合样本检测（PST）在检测动物拭子样本中牛α疱疹病毒1型（BoAHV-1）方面的可行性和成本效益。研究使用了五个样本组成的混合池，并对检测流程进行了两项改进以提高其灵敏度。用于DNA提取的样本初始体积从200 μL增加到500 μL，在实时PCR反应体系中使用的提取DNA量也从5 μL增加到了10 μL。在初步的BoAHV-1病毒添加实验中，改进后的PST方法得到的Ct值比传统的单个样本方法低1.1个Ct值，这证明了所选混合池大小的有效性。随后，对1073个拭子样本组成的215个混合池进行筛查，发现其中29个混合池（13.5%）对BoAHV-1呈阳性。进一步检测这些29个阳性混合池所包含的145个单个样本后，发现22个混合池中至少有一个样本呈阳性，而7个混合池中没有阳性样本。通过混合样本检测发现的BoAHV-1阳性率为2.86%（95%置信区间：1.92%–4.08%），与单个样本检测的结果2.80%（95%置信区间：1.97–3.96%）非常接近。这种相似性表明混合样本检测（PST）方法在监测研究中具有潜在的应用价值。总之，本研究的结果证明了使用实时PCR检测方法对动物中的BoHV-1感染进行检测和确认的可行性。