血清抗念珠菌溶素IgG间接ELISA检测：一项辅助诊断儿童侵袭性念珠菌病的创新性研究

本研究通过建立间接酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清抗念珠菌溶素（candidalysin）IgG水平，证实其在侵袭性念珠菌病（IC）诊断中的优异性能（AUC 0.870，灵敏度87%，特异度70.5%）。该技术能有效区分定植与侵袭性感染，为临床提供新型辅助诊断工具，尤其适用于深部念珠菌病的早期鉴别。

　　

ABSTRACT

侵袭性念珠菌病（IC）作为临床最常见的真菌感染，其早期诊断面临重大挑战。研究团队发现念珠菌溶素——白念珠菌菌丝特异性分泌肽，在IC患者血清中呈现显著升高的IgG抗体水平。通过5年队列研究（121例IC患者 vs 105例对照），开发出间接ELISA检测方法，在验证集1（确诊IC）和验证集2（确诊/拟诊IC）中分别获得0.818和0.870的AUC值，证实其诊断效能优于传统培养法和β-D-葡聚糖（BDG）检测。

INTRODUCTION

白念珠菌（C. albicans）作为条件致病菌，可在75%健康人群中共生，但在免疫抑制患者中可引发死亡率达65%的IC。当前诊断金标准（血培养和组织病理）存在灵敏度低（21%-71%）、耗时长（2-5天）等问题。研究聚焦念珠菌溶素——该毒素通过破坏宿主细胞膜促进侵袭，其C端富含赖氨酸的IVKAFKGNK序列被鉴定为优势抗原表位。

MATERIALS AND METHODS

研究纳入湖南儿童医院2019-2024年病例，分为确诊IC（n=20）、拟诊IC（n=57）、疑似IC（n=44）及非IC对照组。采用棋盘滴定法优化ELISA参数：包被抗原1μg/孔，血清稀释度1:500（IgG）/1:250（IgM）。通过ROC曲线确定IgG最佳截断值为0.1647-0.1768 ng/mL，批内批间变异系数（CV）分别<10%和<20%。

RESULTS

抗原性验证：点杂交显示念珠菌溶素在IC患者血清中信号强度显著高于β-葡聚糖（图1）。

诊断效能：

• 确诊IC vs 对照：灵敏度80%，特异度73.3%

• 扩大验证组：灵敏度提升至87%，阳性符合率（PPA）达88.6%

  部位特异性：粪便培养阳性患者的抗体阳性率最高（86.7%），其次为血液（83.3%）和痰液（81.3%）。

  机制关联：抗体水平与特定临床指标显著相关，如：

• 念珠菌血症患者：单核细胞计数（r=0.42, P<0.05）

• 呼吸道定植者：嗜酸性粒细胞比例（r=0.38, P<0.01）

DISCUSSION

该ELISA技术的创新性体现在：

1. 特异性优势：仅识别白念珠菌、热带念珠菌等产念珠菌溶素菌种，避免BDG法的广谱交叉反应

2. 临床价值：在15%低球蛋白血症患者中仍保持检测效力，突破免疫抑制患者的诊断瓶颈

3. 治疗指导：通过抗体动态监测可区分急性期（IgM主导）与恢复期（IgG主导）感染

研究局限性包括成人数据缺乏、未整合甘露聚糖等补充标志物。未来需开展多中心验证以优化截断值标准。

ACKNOWLEDGMENTS

获国家科技部重点研发计划（2021YFC2701800）、湖南省自然科学基金（2023JJ30324）等资助。