腺病毒载体表达PEDV多表位免疫原融合黏膜佐剂诱导妊娠母猪母源与乳源免疫的研究

本研究针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的仔猪高死亡率问题，开发了四种重组腺病毒(rAd)疫苗候选株，通过融合细菌外膜蛋白H(OmpH)、霍乱毒素B亚基(CTB)和GM-CSF/IL-4融合蛋白(GI)等黏膜佐剂增强免疫原PEDVSME的免疫效果。结果表明，rAd.PEDVSME-CTB诱导最高血清IgG中和抗体，而rAd.PEDVSME-OmpH显著提升初乳中和抗体持久性，为PEDV疫苗开发提供新策略。

　　

猪流行性腹泻病毒(PEDV)是困扰全球养猪业的头号病原体，其导致的仔猪腹泻死亡率高达80-100%。尽管现有疫苗在一定程度上缓解了疫情，但传统灭活疫苗和减毒活疫苗存在免疫保护不充分、无法诱导有效乳源免疫等瓶颈问题。特别是在泰国等PEDV流行地区，病毒基因组的快速变异使得疫苗交叉保护效果大打折扣。

针对这一难题，泰国玛希隆大学兽医学院（Faculty of Veterinary Science, Mahidol University）的研究团队创新性地设计了一种多表位融合免疫原PEDVSME，包含COE结构域和S蛋白的四个中和表位（M、SS2、SS6和2C10），并通过重组腺病毒(rAd)载体系统递送，同时融合三种黏膜佐剂（OmpH、CTB和GI）以增强免疫应答。这项发表在《Animal Diseases》的研究，首次系统比较了不同佐剂策略对妊娠母猪母源和乳源免疫的影响。

研究采用Gateway克隆系统构建重组腺病毒，通过HEK293A细胞扩增病毒，Western blot和免疫荧光验证蛋白表达。50头妊娠母猪随机分为五组，分别接种rAd.PEDVSME及其三种佐剂变体或PBS对照，采用prime-boost免疫策略。通过ELISA、中和试验和ELISPOT等技术评估体液/细胞免疫，并追踪抗体经初乳向仔猪的转移规律。

免疫原设计与rAd疫苗构建

研究设计的PEDVSME免疫原巧妙整合了COE结构域（aa 488-645）和四个中和表位，通过V5标签实现表达追踪。Western blot显示所有变体在PK-15细胞中均成功表达，其中rAd.PEDVSME-GI通过共定位实验证实了GM-CSF/IL-4融合蛋白的共表达。

妊娠母猪免疫应答

血清学分析显示：

• rAd.PEDVSME-CTB诱导最高IgG水平（P<0.05），中和抗体效价达16倍

• rAd.PEDVSME-OmpH显著提升IgA应答（PEDVSME-ELISA检测P<0.05）

• 初乳中IgG占主导（OD₄₅₀ 0.4-0.5），且与中和活性强相关（R²=0.232）

乳源免疫传递特征

所有佐剂化疫苗的初乳抗体水平均显著高于对照组（P<0.05），但仅rAd.PEDVSME-OmpH组仔猪在断奶期（4周龄）仍维持显著中和效价（P<0.05），表明OmpH可延长被动免疫持续时间。

B细胞表位应答分析

COE-2、COE-3和S1B-17等表位在初乳中优先诱导IgG而非IgA，印证了系统免疫对乳源抗体的贡献。

细胞免疫与安全性

ELISPOT检测到CTB和GI组IFN-γ分泌增加，提示佐剂可增强T细胞应答。所有疫苗均未引起局部或全身不良反应。

这项研究不仅证实腺病毒载体可有效递送PEDV多表位抗原，更揭示了不同佐剂的免疫极化特性：CTB偏向Th2通路增强IgG，而OmpH通过靶向M细胞促进黏膜IgA应答。特别值得注意的是，rAd.PEDVSME-OmpH诱导的乳源抗体虽然绝对值非最高，但其在仔猪体内的持久性最佳，这为设计兼顾效力和持久性的PEDV疫苗提供了关键理论依据。未来研究需进一步验证该疫苗对活病毒攻击的保护效果，并探索黏膜接种等递送方式的优化潜力。