猪呼吸道冠状病毒受体结合域B细胞表位的单克隆抗体筛选与表征研究

来自国内的研究人员针对猪呼吸道冠状病毒(PRCV)入侵机制的关键靶点——刺突(S)糖蛋白受体结合域(RBD)，通过杂交瘤技术成功制备特异性单克隆抗体2E6，并采用分段表达策略结合点杂交(Dot blot)和间接免疫荧光(IFA)技术，精准定位出RBD1-3片段(氨基酸329-347)中的线性B细胞表位(334-343)。该表位在PRCV毒株中高度保守且表面暴露，为开发新型诊断试剂和表位疫苗提供了重要靶标。

　　

猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的刺突(S)糖蛋白在病毒入侵过程中扮演关键角色，其S₁亚基上的受体结合域(RBD)能够特异性识别宿主受体——猪氨肽酶N。研究团队成功表达PRCV RBD蛋白后，利用杂交瘤技术制备出单克隆抗体(mAb)2E6，并通过蛋白质印迹(Western blot)和间接免疫荧光(IFA)验证了其特异性。

为解析2E6识别的线性B细胞表位，研究人员将RBD划分为三个重叠片段(RBD-1至RBD-3)，克隆至pET-32a载体并在大肠杆菌(E. coli)BL21(DE3)中表达。点杂交结果显示2E6仅与RBD-1片段(氨基酸299-357)发生反应。通过进一步细分RBD-1为RBD1-1至RBD1-3，并采用pET-32a和pEGFP-C1双载体系统表达，最终锁定表位位于RBD1-3(329-347aa)。

采用合成重叠肽(RBD-P1至P3)进行精细定位，发现最小线性表位核心区位于RBD-P2肽段(334-343aa)。该表位在PRCV各毒株间高度保守，且三维结构分析显示其暴露于蛋白表面，这些特征使其成为开发新型ELISA诊断试剂和设计多肽疫苗的理想靶点。