抑制zeste同源物增强子2（EZH2）通过CRISPR-Cas9筛选增强富马酸二甲酯对恶性T细胞的杀伤作用

这篇研究通过全基因组CRISPR-Cas9筛选发现，抑制组蛋白甲基转移酶EZH2可显著增强富马酸二甲酯（DMF）对恶性T细胞（如皮肤T细胞淋巴瘤/CTCL和Sézary综合征）的杀伤效果。结合FDA批准的EZH2抑制剂他泽司他（tazemetostat）能协同抑制NF-κB通路，为克服肿瘤耐药性提供了新策略。

　　

CRISPR-Cas9筛选揭示EZH2抑制增强DMF对恶性T细胞的杀伤

Abstract

恶性T细胞中核因子κB（NF-κB）通路的持续激活是皮肤T细胞淋巴瘤（CTCL）及其白血病亚型Sézary综合征的标志。富马酸二甲酯（DMF）作为NF-κB靶向疗法在临床试验中显示潜力，但疗效受限。本研究通过全基因组CRISPR-Cas9筛选，发现EZH2（组蛋白赖氨酸N-甲基转移酶）是增强DMF诱导细胞死亡的关键靶点。

Introduction

T细胞恶性肿瘤（如T-ALL和CTCL）中NF-κB的异常激活促进细胞凋亡逃逸。DMF通过抑制硫氧还蛋白-1（Thioredoxin-1）灭活NF-κB，但部分患者响应不足。为突破这一局限，研究团队利用CRISPR-Cas9筛选技术，在T-ALL细胞系CEM中系统性敲除19,114个基因，结合DMF处理，鉴定出EZH2为最显著的敏感基因。

Results

CRISPR筛选锁定EZH2

通过Brunello文库筛选，EZH2靶向的sgRNA在DMF处理组中显著减少（图1E）。EZH2作为多梳抑制复合体2（PRC2）的催化核心，调控组蛋白H3K27甲基化（图1D）。单克隆实验证实，EZH2敲低虽不影响基础增殖，但使CEM细胞对DMF的敏感性提升15.6%（图2D）。

药物联用增效机制

FDA批准的EZH2抑制剂他泽司他（5 μM）单用不引起细胞死亡，但与DMF联用后，CTCL细胞系HH的凋亡率翻倍（图3F）。进一步研究发现，PRC2其他组分（如EED）的抑制剂A-395和MAK683同样增强DMF效果，表明H3K27me3缺失是核心机制（图4D-E）。

临床样本验证

在原代Sézary患者CD4⁺ T细胞中，DMF联合他泽司他或A-395使细胞死亡增加34%，而健康供体细胞无此效应（图5B-C），凸显治疗特异性。

Discussion

本研究首次揭示EZH2-PRC2轴通过表观遗传调控增强DMF疗效的机制。EZH2可能通过调控NF-κB靶基因（如XIAP）或氧化应激响应基因影响DMF敏感性。鉴于他泽司他已获批临床使用，该联合策略有望快速转化，为CTCL等难治性T细胞肿瘤提供新方案。

Material and methods

实验采用CEM（T-ALL）和HH（Sézary）细胞系，通过慢病毒转导构建Cas9稳定表达株。全基因组筛选使用Brunello文库（76,441 sgRNAs），数据分析采用MAGeCKFlute算法。原代细胞来自患者外周血，经CD4⁺分选后，用Annexin V/DAPI流式检测凋亡。组蛋白甲基化通过Western Blot（抗体靶向H3K27me2/3）验证。