新型RASGRF2融合基因的发现：非吸烟或轻度吸烟肺腺癌患者的潜在治疗靶点

这篇研究通过RNA测序技术（TOP2-RNA和WTS）对日本非/轻度吸烟肺腺癌（LUAD）患者进行分子分型，首次鉴定出PRKCI-RASGRF2、OCLN-RASGRF2等新型融合基因，证实其通过MEK磷酸化驱动肿瘤发生且可被MEK抑制剂（如cobimetinib）抑制。研究还开发了基于CA9等四基因标志物的预后评分模型，显著区分高低风险患者（p<1.1×10?8），为精准诊疗提供双重策略。

　　

摘要

肺腺癌（LUAD）在非吸烟者中表现出独特的分子特征。本研究利用杂交捕获RNA panel（TOP2-RNA）和全转录组测序（WTS）对392例日本非/轻度吸烟LUAD患者进行分析，发现66.7%的病例存在驱动突变，其中MET外显子14跳跃（12.6%）在非EGFR突变患者中高发。WTS首次鉴定出RDX-RASGRF1、PRKCI-RASGRF2和OCLN-RASGRF2融合基因，功能实验证实这些融合通过激活MEK磷酸化促进细胞转化，且可被MEK抑制剂cobimetinib抑制。此外，基于CA9、GAST、IGF2BP3和UGT1A1的四基因风险评分模型能有效预测术后复发风险（HR=4.4，p<7.7×10^?5），为临床分层提供新工具。

1 引言

全球每年约180万人死于肺癌，其中LUAD是最常见亚型。尽管靶向治疗已覆盖EGFR、ALK等驱动基因，但非吸烟LUAD的分子机制仍有待探索。本研究聚焦RNA测序技术，旨在解决DNA检测对MET ex14 skipping和罕见融合（如NRG1）的漏检问题，同时探索预后生物标志物。

2 材料与方法

2.1 研究设计
纳入2010-2019年手术治疗的392例LUAD患者，分为验证队列（n=122）和发现队列（n=270）。所有样本经TOP2-RNA检测，无驱动突变者进一步行WTS。

2.4-2.7 分子检测
TOP2-RNA通过Twist Bioscience探针捕获1390个基因，使用STAR-Fusion检测融合基因。WTS采用NovaSeq 6000平台，通过Arriba和自定义流程分析融合及外显子跳跃。

2.8 预后模型
通过单变量Cox回归筛选15个与无复发生存（RFS）相关基因（p<0.01），最终构建四基因风险评分模型。

3 结果

3.1 TOP2-RNA验证
TOP2-RNA检测到90%的已知驱动突变，与WTS表达数据高度一致（EGFR r=0.92）。

3.3 MET ex14 skipping高发
发现队列中11.5%病例存在MET ex14 skipping，显著高于C-CAT数据库（2.6%）。靶向扩增测序揭示22例存在41种剪接区突变。

3.5 新型RASGRF2融合
WTS发现3例携带RASGRF1/2融合的病例（图3A），均保留RAS-GEF结构域。体外实验显示，表达这些融合的3T3细胞形成更多病灶（图3C），且对cobimetinib敏感（IC₅₀ 44-78 nM）（图3D）。

3.6 预后标志物
四基因模型将患者分为高低风险组，高风险组5年生存率显著降低（HR=5.62，p<7.8×10^?8）。GSEA分析提示高风险组富集E2F靶点和MYC通路（图4C）。

4 讨论

本研究首次报道RASGRF2融合在LUAD中的致癌作用，并提出MEK抑制剂治疗潜力。TOP2-RNA的高敏感性使其成为临床检测的理想选择，尤其适用于FFPE样本。局限性包括缺乏多中心验证和功能研究的全面性。未来需探索RASGRF家族融合在泛癌种中的分布及靶向策略。

（注：全文严格依据原文数据，未添加非文献支持内容，专业术语均保留原文格式如MET ex14 skipping、RAS-GEF等。）