口服产热休克蛋白65乳酸乳球菌通过调节Treg细胞缓解巴西利什曼原虫感染的炎症反应

本研究创新性地利用基因工程乳酸乳球菌（L. lactis）递送麻风分枝杆菌热休克蛋白65（HSP65），在巴西利什曼原虫（L. braziliensis）感染的小鼠模型中证实，口服诱导免疫耐受（OT）可显著提升CD4+CD25+FOXP3+和CD4+LAP+调节性T细胞（Tregs）频率，促进IL-10分泌并抑制IFN-γ介导的过度炎症，实现病灶缩小和寄生虫负荷降低的双重疗效。该研究为慢性感染性疾病提供了新型免疫调节策略。

　　

【ABSTRACT】

巴西流行的皮肤利什曼病（CL）由巴西利什曼原虫（L. braziliensis）引发，其特征性溃疡性皮损与过度Th1型炎症反应相关。研究采用基因改造的乳酸乳球菌（L. lactis）递送麻风分枝杆菌（M. leprae）热休克蛋白65（HSP65），在感染4周后的BALB/c小鼠中进行连续4天口服治疗。结果显示，HSP65组小鼠病灶尺寸和寄生虫负荷显著降低，引流淋巴结中促炎因子IFN-γ向抗炎因子IL-10的转化，伴随CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺和膜结合TGF-β（CD4⁺LAP⁺）调节性T细胞（Tregs）扩增。该效应在更严重的硕大利什曼原虫（L. major）感染模型中未显现，提示该疗法对特定免疫平衡状态的慢性感染具有选择性调节作用。

【1 Introduction】

巴西利什曼原虫感染引发的CL以Th1型免疫应答亢进为特征，尽管寄生虫载量低，但高浓度促炎细胞因子导致组织损伤。口服耐受（OT）作为天然免疫调节机制，通过持续摄入抗原诱导抗原特异性Tregs。热休克蛋白家族（HSPs）具有跨物种保守性，其中HSP65可通过TLR2信号通路抑制效应T细胞迁移，或作为Tregs识别的自身抗原发挥抗炎作用。研究团队前期工作已证实，重组L. lactis递送系统在自身免疫性疾病模型中可有效诱导免疫耐受。

【2 Results】

2.1 病灶与炎症控制

HSP65治疗组（Lb/HSP65）在感染5-10周时耳部厚度显著低于对照组（Lb/Lb/?），病理切片显示炎症浸润程度减轻且溃疡发生率降低。值得注意的是，HSP65组在感染7周时出现短暂炎症强度升高，随后快速消退，提示早期免疫激活后及时调控的独特模式。

2.2 寄生虫负荷调控

治疗组耳部病灶在6-9周时寄生虫载量降低10倍，引流淋巴结载量在6-8周显著下降。特别在感染后期（10周），虽然各组寄生虫均接近清除阈值，但HSP65组仍保持更小的病灶尺寸，证实炎症调控与病原清除的解耦联现象。

2.3 细胞因子动态平衡

关键发现显示：①IL-10产量在6-10周持续高于对照组2-3倍；②IFN-γ呈现"双相变化"——早期（6-7周）抑制而后期（9-10周）回升；③IL-10/IFN-γ比值在6-8周显著倾斜。相关性分析证实高IL-10水平与病灶缩小呈显著负相关（r=-0.82）。

2.4 Tregs亚群扩增

流式细胞术揭示：①CD4⁺LAP⁺细胞在6-8周增加2倍，提示膜结合型TGF-β的局部免疫调节；②CD4⁺CD25⁺FOXP3⁺细胞仅在7周短暂升高，反映不同Tregs亚群的时序性激活。

2.5 模型特异性验证

在硕大利什曼原虫（L. major）感染模型中，HSP65治疗未改善Th2型主导的病理进程，病灶进展、寄生虫负荷及IL-4/IL-10水平均无显著变化，凸显该疗法对Th1/Th2平衡状态的精确调控需求。

【3 Discussion】

研究首次证实口服HSP65-L. lactis在已建立感染阶段的治疗价值，其机制可能涉及：①肠道诱导的LAP⁺ Tregs迁移至外周淋巴器官；②HSP65通过分子模拟激活对宿主HSP60的交叉调控；③TLR2依赖的免疫耐受途径。值得注意的是，该疗法对自限性（L. braziliensis）与非自限性（L. major）感染模型的差异效果，为"病原体-宿主免疫稳态"理论提供了新证据。

【4 Material and Methods】

实验采用：①BALB/c小鼠耳部感染模型；②木糖诱导表达系统（XIES）制备重组L. lactis；③流式检测Tregs亚群；④有限稀释法量化寄生虫负荷。统计学处理包含曲线下面积（AUC）分析和非参数检验，确保数据可靠性。