基于RPA-CRISPR-LbaCas12a-LFD系统的红脂大小蠹超灵敏快速检测技术开发

来自中国的研究人员针对红脂大小蠹(Hylurgus ligniperda)这一全球性入侵害虫，开发出基于重组酶聚合酶扩增(RPA)结合CRISPR/Cas12a的现场检测技术。该研究通过优化线粒体COI靶标序列及关键参数，建立的双信号(LFD/荧光)检测体系特异性强、灵敏度达1拷贝/μL，为口岸检疫和森林虫害防控提供了无需专业设备的便携式解决方案。

　　

红脂大小蠹(Hylurgus ligniperda)作为极具破坏力的入侵性树皮甲虫，正严重威胁全球针叶林生态和木材贸易。2020年该害虫首次现身中国山东，其强大的环境适应性和繁殖能力促使科研团队紧急研发新型检测方案。

研究团队巧妙融合重组酶聚合酶扩增(RPA)与CRISPR/Cas12a基因编辑技术，选定线粒体细胞色素c氧化酶亚基I(COI)作为分子靶标。通过精密调控Cas12a蛋白浓度、CRISPR RNA(crRNA)用量及反应温度时间等关键参数，构建出双信号输出体系——既能通过荧光读数仪捕捉信号，又能借助侧流层析试纸条(LFD)实现肉眼判读。

这套"分子剪刀+等温扩增"的组合拳展现出惊人性能：轻松区分红脂大小蠹与5种近缘物种，检测限低至单个DNA拷贝/微升。更令人振奋的是，采用全球不同地理种群样本验证时，该技术展现出卓越的现场适用性，犹如为海关检疫人员配备了可装入口袋的"分子显微镜"。

这项突破性研究为生物安全领域提供了革命性工具：无需复杂仪器，田间地头即可完成精准检测，为阻止外来物种扩散筑起第一道智能防线。