重组CA蛋白ELISA法检测小反刍兽慢病毒抗体的建立及中国流行率调查

本文成功建立了一种基于小反刍兽慢病毒（SRLV）衣壳蛋白（CA/p28）的间接ELISA（iELISA）检测方法，通过棋盘滴定法优化条件（抗原包被浓度300 ng/孔，血清稀释度1:400），其临界值（cut-off）为0.09（M+3SD），与琼脂免疫扩散试验（AGID）相比灵敏度提高400-1600倍，且与6种常见病原体无交叉反应。研究首次系统揭示中国6省13市4786份临床样本的SRLV血清阳性率为10.64%（0.85%-40%），为防控该隐性感染导致的畜牧业经济损失提供了高效筛查工具。

　　

引言

小反刍兽慢病毒（SRLV）引起的梅迪-维斯纳病（MV）和山羊关节炎脑炎（CAE）是全球绵羊和山羊的重要传染病。尽管多数感染呈亚临床状态，但会导致产奶量下降、寿命缩短等经济损失。SRLV基因组中高度保守的衣壳蛋白（CA/p28）成为血清学诊断的理想靶标。中国缺乏经济高效的检测方法，导致流行病学数据匮乏。

材料与方法

研究团队以SRLV-X株（基因型A2）的CA蛋白为包被抗原，通过棋盘滴定法优化iELISA条件：确定5%脱脂牛奶封闭60分钟、血清反应90分钟、二抗（1:10,000）反应45分钟、TMB显色5分钟为最佳体系。使用181份WB验证阴性血清确定临界值（S/P值≥0.09为阳性），并评估与PPRV（小反刍兽疫病毒）、布鲁氏菌等病原体的交叉反应。

结果

方法学验证：

• 灵敏度：iELISA检测限达血清稀释1600倍，而商品化AGID试剂盒仅能检出未稀释样本
• 特异性：与6种病原体抗血清无交叉反应（S/P值均<0.09）
• 重复性：批内变异系数（CV）2.76%-4.37%，批间CV 5.13%-6.60%

临床样本检测：

• 与商品化ELISA试剂盒（ID.Vet）符合率76.73%，但阳性率更低（11.32% vs 33.33%），可能与后者包含Env蛋白表位有关
• 全国调查显示：内蒙古阿拉善盟阳性率最高（17.15%），新疆巴州规模化羊场达40%，放牧羊群（6.24%）显著低于集约化养殖（11.76%）

讨论

该iELISA虽对基因型A2毒株敏感，但可能漏检其他基因型感染。中国流行的SRLV毒株以A2、B1型为主，未来需结合PCR技术完善分型诊断。值得注意的是，CA蛋白抗体在感染早期即可持续检出，而Env蛋白抗体可能出现较晚，提示联合多抗原可提升检测灵敏度。

结论

本研究建立的CA蛋白iELISA为中国首次大规模SRLV筛查提供了可靠工具，揭示10.64%的总体感染率，为制定防控策略奠定基础。后续需加强病毒分子流行病学监测，优化诊断方法以应对毒株多样性挑战。