杆状病毒系统表达的山羊痘病毒主要胞内成熟病毒粒子蛋白A27L与P32的特性研究：优于大肠杆菌表达系统

本研究通过杆状病毒表达系统（Baculovirus）成功表达了山羊痘病毒（GTPV）两种关键免疫原性蛋白A27L和P32，证实其相较于大肠杆菌（E. coli）表达系统具有更优的翻译后修饰能力、天然构象保持及诊断抗原活性。其中截短型P32（tr-P32）表达量显著提升，所有重组蛋白均能与GTPV/绵羊痘病毒（SPPV）阳性血清特异性结合，为羊痘病毒属（Capripoxvirus）血清诊断及疫苗开发提供了高灵敏度、高特异性的候选抗原。

　　

亮点

杆状病毒表达系统凭借其卓越的翻译后修饰能力，成为生产具有天然构象和免疫原性重组蛋白的首选真核平台。本研究首次在山羊痘病毒（GTPV）中实现两种关键胞内成熟病毒粒子（IMV）蛋白——A27L与P32（含截短型tr-P32）的昆虫细胞高效表达，其诊断性能全面超越传统大肠杆菌表达产物。

材料与方法

病毒、细胞系与生物制剂

实验采用印度兽医研究所保藏的Uttarkashi疫苗株GTPV（第60代），于Vero细胞中扩增后提取基因组DNA。选用两种昆虫细胞系：草地贪夜蛾（Sf-21）和粉纹夜蛾（High Five? TN5），在27°C无CO₂条件下培养。

重组杆粒构建

通过特异性引物PCR扩增获得A27L（466 bp）、全长P32（988 bp）及tr-P32（796 bp）基因片段（图1 A-C），定向克隆至pFastBac HT A载体。经转座、蓝白筛选获得重组杆粒，通过细胞转染产生重组杆状病毒。

讨论

研究揭示：1）tr-P32因去除疏水端而溶解度显著提升；2）rA27L在天然条件下自发形成二聚体/四聚体；3）两种蛋白在1:50血清稀释度下仍能精准区分GTPV/SPPV感染，且不与正痘病毒属交叉反应。这些特性使其成为理想的诊断抗原和亚单位疫苗候选，为羊痘防控提供新工具。