DPP4抑制剂相关大疱性类天疱疮中独特表位的鉴定及其临床意义

推荐：研究人员针对DPP4抑制剂(DPP4i)诱发的大疱性类天疱疮(DPP4i-BP)缺乏特异性诊断标志物的问题，通过构建"结构域交换BP180"蛋白，首次鉴定出DPP4i-BP特异性靶向BP180的NC7-Col4区域表位，揭示了HLA-DQA1 * 05/DQB1 * 03:01限制性抗原呈递机制，为早期诊断和精准治疗提供新策略。

　　

大疱性类天疱疮(BP)是老年人最常见的自身免疫性水疱病，其发病与靶向BP180/BP230的自身抗体密切相关。近年来，糖尿病治疗药物二肽基肽酶-4抑制剂(DPP4i)被发现可诱发特殊类型的BP(DPP4i-BP)，这类患者具有非炎症性临床表现和独特的免疫学特征。然而，DPP4i-BP与典型BP的鉴别诊断困难，且缺乏特异性检测方法，导致临床误诊率和死亡率居高不下。更棘手的是，约10.9%使用DPP4i的糖尿病患者虽未出现BP症状，却已检测到抗BP180抗体，亟需建立早期预警体系。

为解决这一难题，北海道大学医学院的研究团队创新性地采用"胶原蛋白-胶原蛋白结构域交换"技术，构建了保留天然三聚体构象的BP180重组蛋白。通过对60例DPP4i-BP患者血清的大规模分析，结合HLA分型和计算生物学预测，在《SCIENCE ADVANCES》发表了突破性成果。研究主要运用了：1) 结构域交换BP180蛋白的ELISA/WB表位定位技术；2) 基于netMHCIIpan4.3算法的HLA-II类肽表位预测；3) 日本DPP4i-BP患者队列(n=60)的回顾性临床分析。

Differential reactivity of DPP4i-BP autoantibodies to the conformational structures of BP180

通过C端截断BP180蛋白的免疫印迹分析发现，73%的NC16A阴性DPP4i-BP血清靶向Ser⁹⁷⁸-Pro¹¹⁷⁴(NC11-NC7区域)，而ELISA则显示抗体更倾向识别Gly¹¹⁷⁵-Asp¹³⁴⁰(Col6-Col3)，提示构象表位的重要性。

Formation of the Col trimer by domain-swapped BP180 proteins

研究团队巧妙利用XIII型胶原(COL13)作为骨架，构建了5种保留天然三聚体构象的BP180结构域交换蛋白，通过非变性电泳验证了其正确折叠。

DPP4i-BP autoantibodies preferentially reacted to the NC7-Col4 region of BP180 in ELISA

结构域交换ELISA显示，96%的DPP4i-BP血清特异性识别NC7-Col4区域(灵敏度96%，特异性100%)，而典型BP血清无此反应特征。

Primary epitope prediction using DPP4i-BP dominant HLA classes

计算预测发现，HLA-DQA1 * 05:05/DQB1 * 03:01对Col5-NC5边界区肽段(PPGVSGALATYAAEN)具有最高亲和力(%rank=0.02)，实验证实携带该HLA单倍型的患者NC7-Col4抗体水平显著升高(P<0.05)。

Characteristics of DPP4i-BP with anti-BP180 NC7-Col4 autoantibodies

临床数据分析揭示：使用利格列汀的DPP4i-BP患者更易产生NC7-Col4抗体，而西格列汀使用者较少(P=0.043)；具有NC7-Col4抗体的患者从用药到发病时间更短(20 vs 35.5个月，P=0.0028)，且水疱/糜烂评分更高(24 vs 8，P=0.0458)。

Detection of anti-BP180 NC7-Col4 autoantibodies in pre-clinical patients

在未发病的DPP4i治疗糖尿病患者中，也检测到针对NC7-Col4等多种BP180表位的抗体，提示其可能作为预警标志物。

这项研究首次阐明了DPP4i-BP的特异性免疫识别机制：在遗传易感个体(HLA-DQA1 * 05/DQB1 * 03:01携带者)中，DPP4i可能通过改变抗原呈递过程，诱发靶向BP180 NC7-Col4构象表位的自身免疫反应。所开发的NC7-Col4特异性ELISA不仅解决了DPP4i-BP的诊断难题，更能识别高危患者——那些抗体阳性但未发病的糖尿病患者可能需要更密切监测。值得注意的是，抗NC7-Col4抗体阳性且合并NC16A抗体的患者往往病情更重，需要系统性糖皮质激素治疗，这为临床分层治疗提供了分子依据。该成果不仅推进了对药物诱导自身免疫疾病机制的理解，更为精准医学时代下的个体化诊疗树立了新范式。