基于荧光素衍生物的免分离快速检测H3N2病毒刺突蛋白探针研究

本文推荐一种基于荧光素(FLC)及其衍生物(5-FAM/5-FTSC)的"turn-on"型荧光探针，实现了对H3N2流感病毒刺突蛋白(H3/N2)的免分离快速检测。该技术通过探针分子进入蛋白疏水腔后荧光增强的机制，检测限低至0.442 nmol/L(N2)，较ELISA和RT-PCR更快速经济。分子对接模拟揭示了探针-蛋白相互作用机制，实际病毒样本验证表明其检测结果与ELISA高度一致且重复性更优，为公共卫生监测提供了新工具。

　　

Highlight
四种荧光探针在不同水含量DMSO/H₂O混合体系中的光物理性质与结构转变

如图2A和S1所示，四种探针在纯DMSO中均未表现出350nm以上的吸收或500nm以上的发射。但在DMSO/H₂O混合体系中，随着水含量增加，FLC、5-FAM和5-FTSC在485nm处的吸收和525nm处的发射显著增强，而FDA几乎无变化。这种差异源于前三者可通过氢键作用发生螺环开环转换，而FDA因酚羟基酯化无法进行该转换。

Conclusion
总结表明，具有螺环转换能力的FLC、5-FAM和5-FTSC能在水含量增加的DMSO/H₂O体系中从无荧光的闭环构型（变体A）转变为强荧光的开环构型（变体B）。分子对接模拟显示，荧光探针可进入蛋白疏水腔并被周围氨基酸残基限制，通过抑制分子内运动实现荧光增强响应。该免分离检测方法为早期公共卫生监测提供了有价值的技术手段。