基于qPCR定量抗原-受体相互作用的中和抗体模块化通用检测平台

本文推荐一种创新的中和抗体(nAb)检测平台NAD-qPCR，通过将病毒RBD抗原模块与ACE2模拟迷你蛋白受体模块结合，利用qPCR技术将中和能力转化为可定量的DNA信号。该平台对SARS-CoV-2 nAb检测限达4 ng/μL，具有模块化设计可适配其他病原体，为疫苗评估和免疫监测提供了高通量解决方案。

　　

Highlight
我们开发的中和抗体检测qPCR平台（NAD-qPCR）通过定量抗原-受体相互作用来评估中和抗体效力。以SARS-CoV-2为概念验证目标，该系统包含：1）病毒RBD抗原模块与报告DNA共价连接的杂交探针；2）ACE2模拟迷你蛋白（LCB1）修饰的磁珠受体模块。当中和抗体存在时，会竞争性减少探针结合，导致qPCR信号降低，从而实现中和活性的定量检测。

Materials and reagents
RBM-C3和2B-LCB1重组质粒由金益生物制备，镍柱纯化试剂购自武汉竞成生物。SARS-CoV-2 Spike-RBD蛋白、商业中和抗体（货号40592-MM57）及临床血清样本用于方法验证。

Design of the NAD-qPCR platform
平台核心设计（图1）包含：
1）RBM-DNA杂交探针：通过硫醇-马来酰亚胺化学将RBD抗原与qPCR报告DNA偶联；
2）LCB1磁珠：该56氨基酸迷你蛋白以nM级亲和力模拟ACE2结合，成本低廉且可大规模生产。

Conclusions
NAD-qPCR成功将nAb对病毒-受体互作的抑制转化为可定量的DNA信号，对商业nAb检测限达4 ng/μL，并能有效区分疫苗接种者的血清中和活性。模块化设计使其可通过更换组件快速适配其他病原体检测。