SARS-CoV-2受体结合域-破伤风类毒素结合疫苗SOBERANA 02的LC-MS/MS结构表征与位点解析

来自古巴芬莱疫苗研究所的研究人员采用LC-MS/MS技术，首次解析了抗SARS-CoV-2结合疫苗SOBERANA 02的结构特征。该研究通过马来酰亚胺-硫醇化学将RBD蛋白Cys538与破伤风类毒素(TT)的赖氨酸残基偶联，鉴定出12-18个关键偶联位点，揭示了d-TeNT(占TT蛋白30%-56%)为主要载体蛋白的分子机制，为TT载体疫苗的研发提供了重要理论依据。

　　

这项研究采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术深入解析了SOBERANA 02疫苗的分子结构。这种创新型疫苗通过精巧的马来酰亚胺-硫醇化学反应，将SARS-CoV-2刺突蛋白的受体结合域(RBD)C端538位半胱氨酸(Cys⁵³⁸)与破伤风类毒素(TT)载体蛋白的赖氨酸残基共价连接。

质谱分析揭开了TT载体蛋白的复杂组成：15种主要蛋白占总质量的78%，其中脱毒破伤风神经毒素(d-TeNT)独占鳌头(30%-56%)。当使用BMPS(3-马来酰亚胺丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)激活时，d-TeNT上107个赖氨酸中有102个(95%)成功接上马来酰亚胺基团，但受空间位阻影响，最终只有22个(20%)与RBD的C端酶解肽段(⁵³⁸CVNF⁵⁴¹-六组氨酸标签)形成稳定连接。

研究团队创新性地采用亲和层析结合质谱的策略，通过两类特征肽段——携带偶联赖氨酸的线性肽与具有稳定化连接子(水解型/转环化)的II型肽段，分别鉴定出12个和18个精确偶联位点。有趣的是，RBD还会"雨露均沾"地与10种低丰度载体蛋白发生次级偶联。这项研究不仅首次绘制出TT载体疫苗的分子连接图谱，更为新型结合疫苗的设计提供了精准的"分子蓝图"。