基于微滴式数字PCR技术的多年生黑麦草内生真菌Epichlo? festucae定殖检测与定量研究

【编辑推荐】来自国际研究团队创新性开发探针法微滴式数字PCR(ddPCR)技术，成功实现多年生黑麦草内生真菌Epichlo? festucae var. lolii的高灵敏度检测与绝对定量。该研究攻克传统方法(如EvaGreen染料法)背景噪音高的技术瓶颈，最低可检测2拷贝真菌DNA，在人工接种样本中检出4-126拷贝/20μL，天然带菌样本达3620拷贝/20μL，为植物-微生物互作研究提供突破性检测方案。

　　

在冷季型禾草健康维护领域，Epichlo?属内生真菌扮演着关键角色，其通过提升宿主抗逆性和抗病虫能力显著影响生态系统功能。其中Epichlo? festucae var. lolii与多年生黑麦草(Lolium perenne)的共生关系尤为突出。传统检测手段如组织化学染色、微生物培养和血清学检测存在灵敏度低、耗时长及交叉反应等问题，而常规PCR和定量PCR(qPCR)虽提高灵敏度却易受抑制剂干扰且依赖标准品定量。

本研究突破性建立探针法微滴式数字PCR(digital droplet PCR, ddPCR)检测体系，实现对E. festucae定殖的精准诊断与绝对定量。相较于背景噪音显著的EvaGreen染料法，该技术灵敏度提升至2拷贝/反应，在10例人工接种样本中稳定检出(4-126拷贝/20μL)，天然带菌样本检测值高达3620拷贝/20μL。该成果不仅创立了首个E. festucae的ddPCR检测标准，更为研究真菌定殖动力学、宿主-微生物互作机制及生态适应性进化提供了革命性的技术支撑。