TRAF2通过新型基序结合TIFA并促进其自噬降解的分子机制研究

这篇研究揭示了TRAF2通过新型保守基序（Pro159-Xaa-Xaa-Glu162）与TIFA结合的分子机制，并首次报道ADP-庚糖（ADP-heptose）通过自噬途径降解TIFA的过程需要TRAF2和TRAF6的共同参与。该发现为ALPK1-TIFA信号通路的调控提供了新视角，对理解宿主抗微生物感染的免疫监视机制具有重要意义。

　　

结构预测揭示TIFA寡聚化机制

通过AlphaFold3预测，磷酸化Thr9的TIFA通过其FHA结构域形成反平行二聚体，解释了TIFAsome（TIFA多聚体）的形成基础。无序的C端区域（144-184位氨基酸）包含关键的TRAF6结合基序（Pro176-Xaa-Glu178-Xaa-Xaa-Glu181），而N端14个氨基酸同样呈现无序状态。

C端截断揭示TRAF2结合区域

渐进式截断实验显示，TIFA[1-172]缺失TRAF6结合位点但仍保留TRAF2结合能力，而TIFA[1-157]则完全丧失TRAF2结合活性。关键序列RPIPEYGT（158-165位）中，Pro159和Glu162被证实为TRAF2结合的核心残基——突变实验表明，Glu162与TRAF2的Trp356/Lys364形成静电相互作用，而Pro159的突变（如P159D/Q）会完全破坏结合。

双结合基序的进化保守性

除上述新型基序外，TIFA的Leu-Leu-Gln150-Glu151序列与经典TRAF2结合基序（P/S/A/T-Xaa-Q/E-E）相似。Glu151突变（E151A/Q）完全阻断TRAF2结合，而E151D仅部分削弱，这与脊椎动物中Glu151的高度保守性一致。值得注意的是，斑马鱼TIFA中Glu162被天冬氨酸（Asp）取代，而人类TIFA的E162D突变也表现出部分功能保留。

ADP-庚糖触发TIFA自噬降解

持续刺激实验显示，ADP-庚糖在激活IKKβ（诱导IκBα蛋白酶体降解）后，通过自噬途径降解TIFA：

• 自噬抑制剂巴弗洛霉素A1（bafilomycin A1）和氯喹（chloroquine）完全阻断TIFA降解

• 溶酶体蛋白酶抑制剂E64-D抑制TIFA片段（可能由组织蛋白酶切割产生）的生成

• 与IκBα不同，蛋白酶体抑制剂硼替佐米（bortezomib）不影响TIFA降解

TRAF家族蛋白的功能分工

尽管TRAF6敲除（KO）细胞中TIFA降解延迟，但TRAF2 KO或c-IAP1降解剂BV-6处理均不影响该过程，表明：

• TRAF6的E3连接酶活性非必需，但其蛋白支架功能不可或缺

• TRAF2/c-IAP1复合物可补偿TRAF6缺失时的泛素链合成（Lys63-linked）

• TBK1（TANK-binding kinase 1）未被纳入该调控网络

这些发现揭示了宿主通过ALPK1-TIFA-TRAF轴感知微生物ADP-庚糖的分子机制，为炎症性疾病和感染性疾病的治疗提供了潜在靶点。