gga-miR-30a-5p的表达规律及其对鸡脂肪沉积的调控

　　

摘要：

【目的】 miR-30a-5p为miR-30家族成员，其在鸡脂肪沉积中的作用尚未见报道，通过对gga-miR-30a-5p在鸡腹部脂肪及肌内脂肪沉积中的作用研究，为解析鸡腹部脂肪和肌内脂肪生成的机制研究奠定基础。【方法】 以优质黄羽肉鸡（矮小型）S3系和隐性白羽鸡（RR）为试验对象，利用荧光定量PCR检测gga-miR-30a-5p在腹部脂肪、肝脏和腿肌组织0周（0W）、2、4、8、14和16W及腹部脂肪细胞和肌内脂肪细胞增殖期、分化期的表达变化；腹部脂肪细胞及肌内脂肪细胞中分别转染gga-miR-30a-5p mimics和inhibitor，荧光定量PCR检测ga-miR-30a-5p的表达变化；油红O染色，异丙醇萃取脂滴，检测转染gga-miR-30a-5p mimics和inhibitor后腹部脂肪和肌内脂肪细胞脂滴沉积变化；利用生物信息学分析，预测gga-miR-30a-5p的作用靶基因。【结果】 gga-miR-30a-5p在不同组织（腹部脂肪、肝脏和腿肌组织）中的表达存在显著的品种差异性（P<0.05）。在腹部脂肪组织中，0周龄时gga-miR-30a-5p在隐性白羽鸡中的表达显著低于S3系鸡（P<0.05）。S3系和隐性白羽鸡0周龄时gga-miR-30a-5p表达最高，显著高于其他周龄（P<0.05），其他周龄间的表达差异不显著（P>0.05）；在肝脏组织中，16周龄时gga-miR-30a-5p在RR鸡中表达显著低于S3系鸡（P<0.05）。在S3系鸡中，16周龄肝脏组织中的gga-miR-30a-5p表达水平显著高于其他周龄（P<0.05），在RR鸡中，16周龄肝脏组织中的gga-miR-30a-5p表达水平显著高于0周龄和8周龄（P<0.05）；在腿肌组织中，16周龄时gga-miR-30a-5p在RR鸡中的表达显著低于S3系鸡（P<0.05）。gga-miR-30a-5p在S3系鸡14周龄时表达最低，显著低于2、8和16W（P<0.05），RR鸡腿肌组织各个周龄间的表达差异不显著（P>0.05）。在腹部脂肪细胞中，gga-miR-30a-5p在增殖期的表达显著低于分化期4 d和6 d的表达（P<0.05）；肌内脂肪细胞中，增殖期与分化期1 d的表达差异不显著（P>0.05），分化期4 d和6 d的表达水平显著高于增殖期（P<0.05），并且随着分化时间的延长，其表达水平逐渐升高；gga-miR-30a-5p mimics和inhibitor转染腹部脂肪细胞24 h后，gga-miR-30a-5p的表达显著升高和降低，表明gga-miR-30a-5p mimics和inhibitor已成功转染至腹部脂肪细胞；转染gga-miR-30a-5p mimics 3d后，腹部脂肪细胞脂滴沉积能力显著升高；转染gga-miR-30a-5p inhibitor，腹部脂肪细胞脂滴沉积能力则显著降低（P<0.05）；gga-miR-30a-5p mimics和inhibitor转染肌内脂肪细胞24 h后，gga-miR-30a-5p的表达显著升高和降低，表明gga-miR-30a-5p mimics和inhibitor已成功转染至肌内脂肪细胞；转染gga-miR-30a-5p mimics 3 d后，肌内脂肪细胞脂滴沉积能力显著升高；转染gga-miR-30a-5p inhibitor后，脂滴沉积能力则显著降低（P<0.05）。靶基因GO、Pathway及蛋白互作分析表明，UBE2I、UBE3C、CUL2、SOSC3和RUNX1可能是gga-miR-30a-5p调控脂肪沉积的预测靶基因。【结论】 gga-miR-30a-5p在不同组织中的表达存在显著的品种差异性；gga-miR-30a-5p具有促进腹部脂肪和肌内脂肪沉积的作用，UBE2I、UBE3C、CUL2、SOSC3和RUNX1是重要的候选靶基因。