LsSAT2与LsAAE3互作调控山黧豆ODAP水平

　　

摘要：

丝氨酸乙酰基转移酶LsSAT2 (serine acetyltransferase, SAT)是山黧豆中神经活性成分β-N-草酰-L-α, β-二氨基丙酸(β-N-oxalyl-L-α, β-diaminopropionic acid, β-ODAP)生物合成的关键酶。为进一步分析LsSAT2的功能及其活性调控，本研究构建了LsSAT2过表达山黧豆毛状根株系，利用免疫沉淀和质谱联用技术(immunoprecipitation mass spectrum, IP-MS)筛选到了LsSAT2的潜在互作蛋白草酰辅酶A合成酶LsAAE3，通过蛋白对接、酵母双杂交(yeast two-hybrid, Y2H)、蛋白质下拉试验(pull down assay)等进行蛋白互作验证及功能分析。结果表明，利用IP-MS从LsSAT2过表达山黧豆毛状根株系中筛选到其潜在的互作蛋白LsAAE3；Y2H和Pull down试验证实了LsAAE3与LsSAT2存在蛋白互作关系；蛋白对接分析表明，LsSAT2通过羧基末端与LsAAE3发生蛋白互作。LsSAT2在山黧豆毛状根株系中的过表达使得β-ODAP水平相比对照降低52.4%，LsAAE3在山黧豆毛状根株系中的过表达则使得β-ODAP水平升高55.9%。上述结果加深了对山黧豆β-ODAP生物合成调控的理解。