金毛狗实时荧光定量PCR内参基因的鉴别和评价

　　摘要： 金毛狗(Cibotium barometz)是一种高经济价值药用蕨类植物，其粗大的根状茎是制备中药狗脊的原材料。从野生植物资源保护和中药资源开发利用考虑，宜加强对金毛狗的科学研究，帮助缓解野生资源保护与中药产业发展之间的矛盾。荧光定量PCR技术是研究植物基因功能常用的方法，而合适的内参基因是该技术的关键之一。目前，金毛狗相关的基因功能研究较少，没有合适的内参基因可用。该研究从前期的金毛狗转录组数据中筛选了12个常用的植物内参基因，通过计算扩增效率，确定8组可用的内参基因引物。根据8组内参基因针对金毛狗10个组织部位的Ct值，采用RefFinder和Normfinder软件筛选出最佳的内参基因是CbUBC4和CbEF1A。若研究金毛狗不同发育时期根状茎中基因的表达变化，CbEF1A和CbUBC4是较合适的内参基因。机械损伤和水淹条件下推荐使用内参基因CbUBC4和CbUBC28，通过检测机械损伤和水淹胁迫条件下一些快速响应基因的表达量变化，进一步证实CbUBC4和CbUBC28的稳定性。该研究为金毛狗不同组织部位基因功能的研究提供了一些合适的内参基因，助力金毛狗分子生物学相关领域的研究工作。