黑色素瘤BRAF p.V600突变cfDNA检测的多方法学比较研究：BRAFI研究的临床转化意义

为解决黑色素瘤BRAF p.V600突变检测标准化难题，西班牙黑色素瘤组（GEM）通过前瞻性多中心研究，比较7种cfDNA检测技术（ddPCR/NGS/RT-PCR）的性能。结果显示数字PCR与Cobas?灵敏度最高（51%），NGS与数字PCR定量结果高度一致（ICC=0.99），为ctDNA动态监测提供方法学依据。

　　

在黑色素瘤治疗领域，BRAF p.V600突变作为关键驱动突变，其检测对靶向治疗选择至关重要。然而，循环游离DNA(cfDNA)检测面临方法学标准化缺失、技术间变异大等挑战，阻碍了液体活检的临床应用。西班牙黑色素瘤组（Spanish Melanoma Group, GEM）的研究团队在《EJC Skin Cancer》发表的研究，通过系统性比较七种检测技术的性能，为临床实践提供了重要证据。

研究采用多中心前瞻性设计，纳入51例经组织学确认的晚期黑色素瘤患者。关键技术包括：1）集中化cfDNA提取（QIAsymphony? DSP病毒/病原体试剂盒）；2）七种检测平台对比（数字PCR：Bio-Rad ddPCR和ThermoFisher dPCR；RT-PCR：Idylla?、Cobas?、PNA-Q-PCR；NGS：Oncomine?和Illumina平台）；3）统计学分析（Kappa一致性检验、Lin's相关系数等）。

【2.1 患者特征】
队列中72.5%为BRAF p.V600E突变，11.8%为p.V600K。cfDNA检测成功细分了61.1%原组织学未明确的p.V600X亚型，凸显液体活检的补充价值。

【2.2 技术性能比较】
数字PCR与Cobas?展现最高灵敏度（51.0%），显著优于Idylla?（37.2%）。NGS平台除检测BRAF突变外，还在19.6%患者中发现KRAS/NRAS等共突变，拓展了基因组视野。值得注意的是，检测阳性率与肿瘤负荷显著相关：内脏转移患者检出率达81%（vs非内脏32%），多转移灶患者达74%（vs单灶43%）。

【方法学一致性】
NGS平台间呈现近乎完美一致性（Kappa=0.92），数字PCR间强一致性（Kappa=0.85）。定量分析显示NGS Illumina与ddPCR的MAF值高度吻合（ICC=0.99），但NGS Oncomine与其他方法定量结果存在差异。13例（25.5%）低MAF样本出现技术间分歧，提示低肿瘤负荷时方法选择尤为关键。

该研究首次系统论证了不同cfDNA检测技术在黑色素瘤中的性能特征：数字PCR凭借高灵敏度成为动态监测优选，而NGS提供更全面的基因组图谱。结果支持ESMO指南将液体活检作为组织检测的补充，并为技术选择提供循证依据——对需要定量监测的治疗响应评估，建议采用NGS或数字PCR；而对快速筛查，Cobas?等RT-PCR仍具实用价值。研究局限性包括单中心提取流程可能影响外推性，未来需探索超低丰度突变检测技术以覆盖更早期患者。这项来自西班牙多中心团队的工作，为推进黑色素瘤精准医疗的液体活检标准化迈出关键一步。