综述：CRISPR介导的实蝇类害虫种群控制新工程

这篇综述聚焦CRISPR/Cas9技术在实蝇科害虫防治中的创新应用，系统阐述了基因编辑工具优化、雌性剔除（SIT改进）和雄性不育诱导等突破性进展，为替代传统辐射不育技术（SIT）提供了精准遗传调控方案。

　　

CRISPR/Cas9原理验证性基因敲除
通过胚胎显微注射核糖核蛋白复合体(RNP)，研究者首先在地中海实蝇（Ceratitis capitata）中敲除白化眼基因（we），建立表型筛选体系。类似策略随后在橘小实蝇（Bactrocera dorsalis）和加勒比实蝇（Anastrepha suspensa）中复制成功，靶向基因为酪氨酸羟化酶（th）和黄色基因（yellow），分别导致黑色素合成障碍和体色异常。

CRISPR/Cas9基因敲入
利用单链寡核苷酸（ssODN）模板，地中海实蝇实现HDR介导的基因标记，为后续构建自限性种群系统奠定基础。在橘小实蝇中，通过引入荧光标记基因构建遗传追踪体系，显著提升释放个体的野外监测效率。

传统种群控制技术改良
维也纳8品系（VIENNA 8）通过Y染色体易位整合白蛹（wp）和温度敏感致死（tsl）基因，但存在雄性半不育缺陷。CRISPR技术揭示tsl实际作用于胚胎发育期，促使开发新型温度敏感性别筛选系统。

靶向雌性发育通路
敲除性别决定关键基因tra导致橘小实蝇和地中海实蝇出现雌性向雄性转化，而tra2突变则产生间性个体。双基因（dsx/fru）调控系统在橘小实蝇中实现100%雄性化，配合雌性特异性致死（fsl）基因驱动，可完全消除释放群体中的雌性个体。

诱导雄性不育策略
橘小实蝇中甲基转移酶（Mettl3/14）、睾丸特异性丝氨酸激酶1（tssk1）等基因敲除导致精子发生障碍，孵化率下降70%-90%。特别值得注意的是，拓扑异构酶（topi）突变使精子丧失运动能力，但保持交配竞争力，完美契合SIT需求。

结论展望
尽管地中海实蝇已建立基于CRISPR的自我传播型基因驱动系统，但跨物种适配性仍需优化。未来研究应聚焦基因编辑效率提升、抗性演化监测及生态风险评估，推动该技术从实验室走向田间应用。