循环肿瘤细胞DNA甲基化标记联合免疫浸润细胞评估III-IV期结直肠癌复发预后及治疗策略

本研究创新性结合循环肿瘤DNA（ctDNA）甲基化标记（ZNF671/ZNF132）与肿瘤免疫微环境（TME）特征，构建了可预测III-IV期结直肠癌（CRC）复发风险的双标记模型（AUC达0.90）。研究发现高甲基化组早期复发率显著升高（75.4% vs 20%），且与低免疫评分（Immunoscore）呈负相关，揭示了表观遗传调控与免疫逃逸的协同作用，为个体化免疫治疗提供新靶点。

　　

Introduction
结直肠癌（CRC）肝肺转移患者即使接受根治手术仍面临高复发风险。研究团队通过分析603个组织与血浆共有的甲基化标记，发现循环肿瘤DNA（ctDNA）表观遗传改变与肿瘤免疫微环境（TME）存在交互作用。ZNF671和ZNF132甲基化被证实可作为预测转移潜能的生物标记，其高甲基化状态导致基因沉默并显著影响T细胞和巨噬细胞浸润。

Methods
研究纳入南方医院2015-2020年308例CRC患者血浆和139例组织样本（含40例原发灶/42例转移灶），采用AnchorDx专利甲基化测序技术检测12,624个CpG位点。通过LASSO算法筛选特征性标记，结合随机森林模型构建风险概率评分（RP score）。免疫微环境分析采用CD3/CD8免疫组化定量（Immunoscore）及xCell算法解析22种免疫细胞浸润。

Results
关键发现包括：

1. 双标记模型在验证集中区分III-IV期CRC的AUC达0.887，高RP评分组12个月内复发风险增加12.25倍
2. ZNF671甲基化与巨噬细胞浸润（r=0.5）及PD-1/CTLA-4表达显著相关，ZNF132则主要调控T辅助细胞（r=0.31）
3. Immunoscore低分组5年复发率高达76.5%，且与RP评分呈负相关（R=-0.31）
4. 4例影像学疑似转移但RP评分低的患者随访79.3个月均未进展，提示模型可辅助TNM分期

Discussion
该研究首次揭示ZNF家族甲基化通过Notch通路调控免疫微环境的机制：

• ZNF671高甲基化可能通过抑制Notch信号影响巨噬细胞极化
• 甲基化-免疫双维度模型将III期患者复发预测准确率提升至87.5%
• 发现ZNF132与T_cm细胞浸润的未知关联为免疫治疗提供新方向

Limitations
验证集样本量较小（n=83）可能影响模型鲁棒性，需多中心研究进一步验证。当前数据表明，整合表观遗传与免疫特征的"甲基化-免疫评分"系统有望成为CRC精准治疗的新决策工具。