MSLN阳性循环肿瘤细胞作为上皮性卵巢癌辅助诊断标志物的价值与机制研究

本研究创新性地将间皮素（MSLN）阳性循环肿瘤细胞（CTCs）作为上皮性卵巢癌（EOC）的新型辅助诊断标志物。通过多组学分析验证MSLN在EOC中的特异性表达，开发EpCAM肽功能化磁性纳米颗粒（Pep@MNPs）高效捕获技术，并在前瞻性队列（n=35）中证实：MSLN(+)CTCs鉴别卵巢良恶性病变的特异性达95%，联合CA125可使敏感性和特异性均突破90%，为EOC早期诊断提供突破性液体活检策略。

　　

研究背景与技术突破

上皮性卵巢癌（EOC）占卵巢癌病例的90%，因缺乏早期特异性标志物导致70%患者确诊时已进展至晚期。现有血清标志物CA125和HE4存在敏感性和特异性不足的缺陷，例如CA125在早期EOC中的漏诊率达50-60%。研究团队通过整合TCGA和GTEx数据库的转录组数据（425例EOC vs 88例正常组织），结合TIGER单细胞测序分析，发现间皮素（MSLN）在EOC中呈现特异性高表达（428.73 TPM），且与肿瘤分期、分级无关。单细胞UMAP图谱显示MSLN特异性富集于肿瘤细胞而非微环境基质细胞，为靶向检测奠定理论基础。

实验验证与技术创新

在细胞和组织层面，流式细胞术和免疫荧光证实OVCAR3等EOC细胞系MSLN表达量显著高于正常外周血单核细胞（PBMCs）（p<0.0001）。免疫组化显示EOC组织中MSLN阳性率较正常卵巢上皮高4倍（IHC评分：28.6 vs 7.2）。团队创新性开发EpCAM肽修饰磁性纳米颗粒（Pep@MNPs），扫描电镜和普鲁士蓝染色证实其对OVCAR3细胞的捕获效率达78.81%，而对Jurkat白血病细胞的非特异性捕获仅0.1%。通过优化抗体稀释比例（1:300），建立MSLN(+)CTCs的免疫荧光检测标准（CKmix⁺/DAPI⁺/CD45^-/MSLN⁺）。

临床诊断效能评估

在前瞻性队列中（15例EOC vs 20例良性病变），MSLN(+)CTCs检测展现显著优势：

• 单指标检测：以1个细胞/2mL为临界值，特异性达95%（显著高于HE4的89.47%），但敏感性为66.67%
• 联合诊断：与CA125联用后，敏感性和特异性分别提升至92.86%和94.74%（AUC=0.925，p<0.0001）
• 早期病例：在6例FIGO I-II期患者中检出4例阳性，提示早期筛查潜力

临床应用前景与局限

该研究突破传统液体活检依赖EpCAM的局限，首次将MSLN(+)CTCs纳入EOC诊断体系。MSLN作为CAR-T疗法靶点的潜力（已有临床前研究证实抗肿瘤活性）为诊疗一体化提供新思路。但样本量较小（n=35）和良性组假阳性问题仍需多中心验证。未来需探索CKmix^-/DAPI⁺/CD45^-/MSLN⁺中间细胞群的生物学意义，并优化纳米颗粒对低EpCAM表达细胞（如SKOV3）的捕获效率。

结论

MSLN(+)CTCs联合CA125构建的评分模型，以92.86%敏感性和94.74%特异性实现EOC诊断效能的突破，为改善患者预后提供新型分子工具。该成果同时为MSLN靶向治疗提供循环生物标志物参考。