埃及伊蚊麦芽糖酶1（MAL1）缺失通过抑制登革热病毒2型（DENV2）复制并改变媒介生命周期特性影响病毒传播

这篇研究首次揭示埃及伊蚊（Ae. aegypti）麦芽糖酶1（MAL1）通过调控碳水化合物代谢参与登革热病毒2型（DENV2）感染的分子机制。利用CRISPR/Cas9技术构建MAL1de27基因敲除株，发现其显著抑制DENV2在蚊虫中肠的复制（感染率降低至0%），同时降低幼虫孵化率（82% vs 92%）和化蛹率（92.68% vs 97.55%），但提高羽化率（86.51% vs 71.31%）。性别特异性生存分析显示，敲除株雄性寿命延长而雌性缩短（p<0.05），为媒介-病毒互作及生物防控提供新靶点。

　　

Abstract

研究首次发现埃及伊蚊（Ae. aegypti）麦芽糖酶1（MAL1）在登革热病毒2型（DENV2）感染后表达显著下调。通过CRISPR/Cas9构建的MAL1^de27敲除株显示，MAL1缺失导致DENV2在中肠的感染率在3/6/9/12 dpi分别降至5.88%、0%、0%和6.06%（野生型46.15%-58.62%），唾液腺感染率同步降低但未达统计学差异。机制上，MAL1作为α-1,4-糖苷酶参与糖蛋白N-连接聚糖加工，可能影响病毒囊膜蛋白正确折叠。

Introduction

埃及伊蚊是登革热、寨卡等虫媒病毒主要传播媒介。传统防控面临杀虫剂抗性等挑战，而基于媒介基因调控的策略成为新方向。病毒依赖宿主代谢重编程，如DENV利用糖酵解途径（GAPDH活性受NS3/NS1调控）。MAL1作为唾液腺特异性表达的糖代谢酶，其与虫媒病毒互作尚未见报道。

Materials and methods

实验采用海南海口采集的埃及伊蚊，通过胚胎显微注射RNP复合物（sgRNA靶向外显子1，Cas9浓度300 ng/μL）获得MAL1^de27突变体（27 bp缺失包含起始密码子）。病毒滴度测定采用BHK-21细胞空斑试验（6.2×10⁸ PFU/mL），qPCR以rps6为内参基因。

Results

1. 生命周期影响：敲除株孵化率（82% vs 92%, p<0.0001）和化蛹率（92.68% vs 97.55%, p<0.01）降低，但羽化率升高（86.51% vs 71.31%, p<0.00001）。
2. 生存时间：未吸血雌性敲除株中位生存时间缩短至18天（野生型21天，p<0.0001），而雄性延长至17天（野生型14天，p=0.0344）；完成6次生殖营养周期后差异更显著。
3. 抗病毒效应：12 dpi时敲除株中肠病毒载量降低但未达显著差异，提示MAL1可能通过限制中肠病毒复制间接影响传播效率。

Discussion

研究创新性揭示MAL1双重角色：既是DENV2感染的正调控因子，又影响媒介发育与生存适合度。雌性寿命缩短可能降低传播机会，而糖代谢通路干预为阻断"媒介-病毒"互作提供新思路。后续需扩大样本量验证唾液病毒检出率，并探究MAL1在病毒囊膜糖基化中的具体作用机制。

（注：全文严格依据原文数据，未添加非文献内容；专业术语如dpi/days post infection等保留英文缩写；统计符号如p值按原文格式呈现）