大黄鱼CD8+ T细胞在抗寄生虫感染中的免疫效应机制及其应用价值研究

本研究针对水产养殖中寄生虫感染导致的经济损失问题，通过开发大黄鱼CD8α特异性单克隆抗体，首次系统揭示了CD8+ T细胞在抗刺激隐核虫（Ci）感染中的动态变化与功能机制。研究发现CD8+ T细胞在粘膜组织富集，感染后出现脾脏和头肾特异性耗竭现象，同时伴随颗粒酶（granzyme a/b）和穿孔素1（perforin 1）等细胞毒性因子的上调，为水产疫苗开发和疾病监测提供了新靶点。

　　

在海洋水产养殖领域，刺激隐核虫（Cryptocaryon irritans, Ci）引发的"白点病"每年造成超1亿美元经济损失，传统化学疗法在开放水域收效甚微。这种寄生虫通过鱼体粘膜入侵，导致养殖大黄鱼等高价值鱼种大规模死亡。问题的核心在于，我们对鱼类抵御寄生虫的细胞免疫机制——尤其是具有"免疫杀手"之称的CD8⁺ T细胞（细胞毒性T淋巴细胞，CTLs）的认识仍停留在分子水平。由于缺乏特异性识别工具，这类细胞在鱼类中的分布特征、抗感染动态及其与哺乳动物的功能异同始终成谜。

福建农林大学（作者单位根据CRediT署名推断）的研究团队突破技术瓶颈，成功制备大黄鱼CD8α单克隆抗体，首次实现该物种CD8⁺ T细胞的精准示踪。通过建立Ci感染模型，研究人员发现：CD8⁺ T细胞在鱼体粘膜免疫屏障中形成"前沿哨所"，感染后出现"脾脏-头肾特异性耗竭"这一反常现象，并揭示其通过颗粒酶-穿孔素途径执行杀伤功能。这项发表于《Fish》的研究，为开发基于细胞免疫的水产疫苗提供了理论依据。

关键技术包括：1）基于NCBI数据库（Gene ID: 104928930）克隆大黄鱼cd8α基因并预测Ig样结构域；2）用杂交瘤技术制备抗CD8α单克隆抗体；3）建立Ci人工感染模型，设置感染组与对照组；4）流式细胞术定量CD8⁺ T细胞亚群；5）qPCR检测细胞毒性基因（granzyme a/b, perforin 1）表达。

【动物与伦理声明】实验用大黄鱼（100±5 g）购自福建宁德养殖场，在配备UV消毒系统的循环水养殖系统中驯养2周，水温控制在20℃。

【CD8α基因与蛋白分析】克隆获得687 bp的cd8α开放阅读框，编码含15个氨基酸信号肽的228-aa蛋白。系统进化分析显示，大黄鱼CD8α与鲈形目鱼类聚为一支，与人/鼠差异显著。抗体表位预测锁定第31-50位氨基酸区域。

【CD8⁺ T细胞组织分布】流式检测发现：CD8⁺ T细胞在鳃（12.7%）、肠（9.3%）等粘膜组织占比显著高于脾脏（4.1%）和头肾（3.8%），提示其倾向于在病原体入侵门户驻防。

【Ci感染应答】急性感染期出现三大特征：1）脾脏/头肾CD8⁺ T细胞绝对数量下降40%-50%，但淋巴细胞总数不变；2）鳃部CD8⁺ T细胞增殖2.1倍；3）细胞毒性基因granzyme a/b和perforin 1表达上调3-5倍。

讨论部分指出，该研究首次揭示鱼类CD8⁺ T细胞存在"粘膜富集-系统耗竭"的双相应答模式。特别值得注意的是，脾脏/头肾的CD8⁺ T细胞耗竭无法通过增殖补偿，这种"免疫瘫痪"现象可能是Ci高致死率的关键因素。而鳃部作为感染门户却维持CTL活性，暗示粘膜免疫的局部保护机制。

研究意义在于：1）建立大黄鱼CD8⁺ T细胞研究的技术体系；2）提出CD8⁺ T细胞耗竭可作为Ci感染严重程度的生物标志物；3）为开发靶向CTL的DNA疫苗或CD8α抗体佐剂提供新思路。作者Guolong Lai等强调，未来需探究CD8αα/αβ亚群的功能分化，以及如何通过免疫干预逆转系统免疫耗竭状态。该成果对保障我国海水养殖业可持续发展具有重要应用价值。