TIGIT阻断联合BCMA-CAR-T疗法在多发性骨髓瘤小鼠模型中的疗效评估：单靶点抑制的局限性探索

这篇研究通过三种策略（抗TIGIT抗体阻断、分泌scFv的4th代CAR-T ARITIGIT、CRISPR/Cas9敲除TIGIT）系统评估了TIGIT阻断对BCMA-CAR-T（ARI0002h）疗效的影响。尽管体外实验显示抗TIGIT抗体可增强细胞毒性，但体内实验未显著改善小鼠生存，仅TIGIT敲除在应激模型中呈现有限生存优势（p=0.07）。研究提示单靶点阻断TIGIT可能不足以克服CAR-T细胞耗竭，为多发性骨髓瘤（MM）联合免疫治疗策略提供了重要参考。

　　

TIGIT阻断策略在BCMA-CAR-T疗法中的系统性验证

ABSTRACT

靶向BCMA的CAR-T疗法在多发性骨髓瘤（MM）中展现出前景，但患者仍面临复发问题。本研究基于ARI0002h（一种4-1BB共刺激域的第二代CAR-T）的临床试验数据，发现T细胞耗竭伴随TIGIT表达升高是耐药机制之一。通过三种方法阻断TIGIT——外源性抗TIGIT抗体、分泌TIGIT阻断性scFv的第四代CAR-T（ARITIGIT）及CRISPR/Cas9敲除TIGIT，研究者系统评估了其对ARI0002h疗效的影响。

Introduction

尽管idecabtagene vicleucel和ciltacabtagene autoleucel等BCMA-CAR-T已获批，但多数患者最终复发。ARI0002h的临床数据显示，复发时CAR-T细胞虽持续存在但功能失调，且TIGIT与PD-1表达显著升高。TIGIT通过结合PVR/CD155和N2/CD112抑制T细胞活性，其通路包含抑制性（TIGIT、CD96）和激活性（CD226）受体。临床前研究表明，TIGIT阻断可恢复T细胞抗MM活性，但联合CAR-T的效果尚不明确。

Materials and methods

研究设计涵盖三种策略：

1. 抗体阻断：使用BMS-986207抗TIGIT抗体；

2. 基因改造CAR-T：构建ARITIGIT，在ARI0002h序列中加入P2A-IgK VIII信号肽和tiragolumab来源的scFv；

3. 基因敲除：通过CRISPR/Cas9靶向TIGIT的gRNA（T45/T46/T52）。

体外实验采用ARP-1/U266细胞系（表达BCMA和TIGIT配体），通过细胞毒性、细胞因子（IFN-γ、IL-2、TNF-α）检测评估效果；体内实验使用NSG小鼠模型，以亚治疗剂量CAR-T模拟应激环境。

Results

1. 抗体阻断：体外可增强ARI0002h对U266的杀伤（PVR高表达），IL-2分泌增加，但体内未改善生存，即使提高抗体剂量或改用患者来源T细胞。

2. ARITIGIT：体外对U266杀伤增强，但在初次肿瘤攻击模型中无生存差异；仅在模拟复发的二次攻击中呈现生存改善趋势（p=0.11）。

3. TIGIT敲除：蛋白敲除效率高于DNA水平（CD4/CD8均>40%），体外活性与野生型相当，但应激模型中生存期延长（p=0.02 vs. UT），与ARI0002h对比未达显著差异（p=0.07）。

高表达N2的ARP-1模型

人为提高N2表达后，TIGIT阻断未显示额外获益，提示PVR可能比N2更具生物学相关性。

Discussion

本研究未能证实单靶点TIGIT阻断可显著提升ARI0002h疗效，可能与以下因素相关：

• 免疫缺陷模型局限：NSG小鼠缺乏肿瘤微环境中的免疫细胞互作；

• 协同机制缺失：既往研究表明TIGIT/PD-1双重阻断可通过CD226通路协同增效；

• 配体异质性：PVR高表达的U266在体外响应更佳，但临床意义需进一步验证。

启示与展望

尽管单靶点策略效果有限，但CRISPR敲除和scFv分泌型CAR-T在特定条件下的微弱优势提示，联合其他免疫检查点（如PD-1）或改造TME可能是未来方向。目前针对TIGIT/PD-1的双重阻断临床试验（如SKYCRAPER系列）结果参差，而CAR-T联合多靶点基因编辑（如PD-1/TIGIT/TIM-3）在淋巴瘤中已显示潜力。本研究的阴性结果为MM联合治疗策略的设计提供了重要基线数据。