突变型p53通过增强子调控免疫抑制性趋化因子表达并削弱胰腺癌免疫检查点抑制剂疗效的机制研究

本研究揭示了胰腺导管腺癌(PDAC)中常见突变p53R172H通过占据并激活Cxcl1远端增强子，依赖NF-κB通路促进免疫抑制性趋化因子表达，进而塑造免疫抑制性肿瘤微环境(TME)并削弱免疫检查点抑制剂(ICI)疗效的分子机制。该发现为改善PDAC免疫治疗提供了新靶点，发表于《Immunity》杂志。

　　

胰腺导管腺癌(PDAC)作为最具侵袭性的恶性肿瘤之一，长期面临治疗响应率低的困境。尽管免疫检查点抑制剂(ICI)在多种癌症中取得突破，但对PDAC几乎无效。这种"冷肿瘤"特性与高度免疫抑制的肿瘤微环境(TME)密切相关。约70%的PDAC存在TP53突变，其中最常见的R175H突变（小鼠中对应R172H）被认为可能获得促癌新功能，但其如何塑造免疫抑制性TME的机制尚不明确。

美国麻省理工学院Koch研究所Dig B. Mahat团队联合哈佛医学院团队在《Immunity》发表重要研究，通过构建等基因细胞系和基因编辑小鼠模型，首次揭示突变型p53(p53R172H)通过劫持增强子调控网络促进免疫逃逸的新机制。研究发现p53R172H特异性激活CXCL1等趋化因子的表达，招募髓系抑制细胞(MDSC)并抑制T细胞浸润，而靶向CXCL1增强子可显著改善ICI疗效。

研究采用CRISPR-Cas9构建等基因细胞系，通过RNA测序筛选p53R172H调控的趋化因子；运用CUT&RUN技术解析转录因子结合图谱；结合PRO-seq检测增强子活性；通过正交移植模型评估免疫微环境变化；采用流式细胞术和多重免疫荧光进行免疫细胞分型；利用TCGA数据库验证临床相关性。

p53R172H调控趋化因子亚群
通过比较Trp53R172H/-与Trp53-/-等基因细胞系的转录组，发现p53R172H特异性上调CXCL1、CXCL5和CCL2等趋化因子。蛋白水平验证显示CXCL1表达量差异最显著（4倍变化），且回补实验证实p53R172H足以恢复这些趋化因子的表达。

构建免疫抑制性TME
正交移植实验显示Trp53R172H/-肿瘤体积较Trp53-/-增大3倍，流式分析揭示其T细胞浸润减少70%而MDSC增加2倍。关键发现是Trp53-/-肿瘤对α-PD-1+α-CTLA-4联合治疗产生完全缓解（60%小鼠长期存活），且幸存者具有免疫记忆。

CXCL1介导核心免疫抑制功能
基因敲除实验证明CXCL1缺失可重现Trp53-/-的表型：肿瘤缩小40%，细胞毒性CD8⁺T细胞增加3倍，中性粒细胞减少50%。CXCL1缺失使ICI治疗组生存期延长2倍，证实其是p53R172H介导免疫抑制的关键效应分子。

增强子劫持机制解析
CUT&RUN技术首次绘制p53R172H全基因组结合图谱，发现其优先占据CXCL1远端增强子（e8695/e8696），而非经典p53结合位点。PRO-seq显示这些增强子活性依赖p53R172H，删除e8696使CXCL1表达降低80%并显著改善ICI响应。

NF-κB的桥梁作用
Motif分析揭示p53R172H结合位点富含NF-κB motif。实验证实NF-κB抑制剂TPCA-1可减少p53R172H在增强子的占据（降低75%），表明p53R172H通过"搭便车"方式依赖NF-κB定位到增强子。磷酸化检测显示p53R172H促进NF-κB p65亚基核转位。

研究结论揭示p53R172H通过"增强子劫持"这一表观遗传新机制，与NF-κB协同激活CXCL1表达，塑造富含MDSC的免疫抑制性TME。该发现不仅阐明PDAC免疫治疗抵抗的关键机制，更提出靶向突变p53-NF-κB-CXCL1轴的治疗新策略。临床意义在于：①解释TP53突变型PDAC对ICI耐药的原因；②提供CXCL1增强子作为精准治疗靶点；③为突变p53的"功能获得"机制提供直接证据。研究采用的等基因模型和增强子删除策略，为肿瘤表观遗传研究提供方法论范例。