CRISPR/Cas9介导CD163/pAPN双基因敲除猪脾脏转录组分析揭示无明显脱靶效应

为解决基因编辑动物潜在安全风险问题，研究人员通过CRISPR/Cas9技术构建CD163/pAPN双敲除(DKO)猪模型，对比野生型(WT)开展脾脏转录组分析。结果显示DKO猪仅出现225-242个差异基因(DEGs)，显著少于发育阶段差异组，且未影响抑癌基因表达。该研究为基因编辑家畜安全性评估提供重要依据。

　　

基因编辑技术为家畜育种提供了革命性工具。研究团队此前通过CRISPR/Cas9结合体细胞核移植技术，成功培育出CD163/pAPN双基因敲除(DKO)猪。这些转基因猪不仅对三种病毒具有抗性，还保持着正常的生产性能。但CRISPR/Cas9可能存在的脱靶效应仍需警惕。

本研究聚焦脾脏——这个重要的免疫器官，通过转录组测序比较野生型(WT)与DKO猪的基因表达差异。令人振奋的是，整体转录图谱显示两组间基因表达高度相似。具体而言：35日龄和11月龄DKO猪分别仅检测到225和242个差异表达基因(DEGs)，这个数量远少于不同发育阶段间的差异基因数。

通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析发现，这些差异基因主要与CD163和pAPN的生物学功能相关。特别值得注意的是，DKO猪中抑癌基因表达未受影响。这些数据表明，双基因编辑对猪脾脏转录组的影响，甚至小于动物自然发育成熟带来的变化。该研究为基因编辑动物的安全性评估提供了重要科学依据，证实CRISPR/Cas9技术在该应用中具有高度特异性。