Syndecan 2蛋白聚糖作为乙型肝炎病毒细胞附着受体的作用机制研究

这篇研究揭示了Syndecan 2（SDC2）作为乙型肝炎病毒（HBV）细胞附着受体的关键作用。通过siRNA沉默、CRISPR/Cas9基因编辑及功能回补实验，证实SDC2通过结合病毒包膜上的apolipoprotein E（apoE）和preS1蛋白促进HBV感染，为靶向HSPGs（硫酸乙酰肝素蛋白聚糖）的抗病毒策略提供了新靶点。

　　

Syndecan 2在HBV感染中的关键作用

ABSTRACT
研究团队前期发现人载脂蛋白E（apoE）富集于有传染性的HBV包膜上，并在病毒感染和形态发生中起重要作用。近期进一步证实低密度脂蛋白受体（LDLR）是HBV高效感染的必要条件。本研究聚焦硫酸乙酰肝素蛋白聚糖（HSPGs）家族成员SDC2，通过实验证明其作为HBV细胞附着受体的功能。

INTRODUCTION
HBV感染是全球公共卫生的重大威胁，可导致慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌（HCC）。尽管现有疫苗能预防感染，但对已感染者缺乏治疗手段。HBV属于嗜肝DNA病毒科，其进入细胞依赖受体介导的内吞作用，钠牛磺胆酸共转运多肽（NTCP）是感染的关键受体。此外，HSPGs作为apoE结合受体，此前已被发现参与多种病毒的细胞附着过程，如GPC5可促进HBV感染，但SDCs家族成员的作用尚未明确。

RESULTS

Profiling of syndecans in HBV infection
通过siRNA沉默四种人类syndecans（SDC1-4）的表达，发现仅SDC2 knockdown显著降低HepG2^NTCP细胞和原代人肝细胞（PHHs）中的HBV感染效率（HBeAg分泌减少80%，HBcAg表达下降）。免疫荧光和Western blot结果一致证实SDC2特异性作用。

Importance of SDC2 for HBV infection
利用CRISPR/Cas9构建SDC2基因敲除的HepG2^NTCP细胞系，发现HBcAg水平降低73%-85%，HBeAg分泌减少约3倍。DNA测序显示SDC2开放阅读框被破坏，功能缺失表型明确。

Restoration of defective HBV infection
通过回补实验，在SDC2^-/-细胞中重新表达SDC2可完全恢复HBV感染能力，排除了基因编辑脱靶效应的可能性，确证SDC2的功能必要性。

Role of SDC2 in HBV cell attachment
TAMRA标记的preS1_2-48和apoE_131-162肽段结合实验显示，SDC2缺失使肝细胞对两者的结合能力降低40%-60%。直接HBV附着实验进一步证实，SDC2敲除使病毒DNA结合量减少80%，而apoE缺陷型HBV的附着也降低60%。preS1竞争性肽段Myrcludex B可剂量依赖性抑制HBV附着（60%-75%），提示SDC2通过同时结合apoE和preS1介导病毒附着。

DISCUSSION
SDC2作为HSPGs家族成员，其HS糖链可能通过静电作用与病毒包膜的apoE、L-HBsAg的preS1及S-HBsAg结合。研究揭示了HBV利用多受体协同感染的复杂性：NTCP介导内吞，而SDC2、LDLR等共同参与初始附着。未来需在人类化小鼠模型中验证SDC2的生理功能，并探索HS衍生物作为抗病毒药物的潜力。

MATERIALS AND METHODS
实验采用HepG2^NTCP、PHHs和HepAD38细胞系，通过siRNA转染、CRISPR/Cas9编辑、qPCR、Western blot、免疫荧光等技术进行分析。功能性肽段结合实验使用myristoylated preS1_2-48和apoE_131-162，数据统计采用GraphPad Prism完成。

ACKNOWLEDGMENTS
研究受美国国立卫生研究院（AI151007等）资助，并感谢德国海德堡大学Stephan Urban教授提供的Myrcludex B试剂。