综述：荧光原位杂交信号放大技术的创新

本文系统综述了荧光原位杂交（FISH）技术的最新进展，重点介绍了RNA Scope、PLISH和SABER等新型信号放大方法在提升低丰度靶标检测灵敏度方面的突破，为基因表达时空分析及疾病诊断（如ALK基因重排检测）提供了技术参考。

　　

Abstract

荧光原位杂交（FISH）作为检测细胞、组织切片乃至三维器官中核酸序列的关键技术，通过互补探针与靶序列结合实现定位分析。传统FISH因灵敏度不足难以检测低丰度靶标，而新兴技术如RNA Scope、PLISH和SABER通过信号放大机制显著提升了准确性与灵敏度，为疾病诊断（如ALK基因重排）和基础研究开辟新路径。

Introduction

从1969年放射性探针的首次应用（Gall和Pardue）到1977年荧光标记（Rudkin和Stollar）的革新，FISH技术逐步发展为基因表达图谱和病原体检测的金标准。其核心优势在于保留空间信息，广泛应用于细胞遗传学、病毒感染及产前诊断等领域。

The historical development of FISH

早期依赖放射性探针的FISH因安全性问题被荧光标记取代。里程碑式进展包括间接免疫荧光法的引入（Rudkin和Stollar），以及近年来CRISPR FISHer系统通过PP7-sgRNA相位分离技术实现活细胞单拷贝基因检测（Lyu等，2022）。

Technical aspects of FISH

实验流程涵盖组织制备、杂交与洗涤三阶段。探针设计需权衡GC含量、二聚体风险等因素（Garhyan等，2013），而组织固定与透化处理直接影响信号强度。

Recent advances in FISH protocol development

针对低丰度靶标，多重信号放大策略成为研究热点：

1. RNA Scope：采用双Z探针设计，通过级联放大使单分子RNA可视化；
2. SABER：利用引物延伸反应串联荧光标记，信号强度提升百倍；
3. PLISH：结合锁核酸（LNA）探针与滚环扩增，增强特异性。

Discussion

尽管新技术大幅提升灵敏度，仍存在探针穿透性差、背景噪音等问题。优化探针化学修饰（如LNA）与自动化成像系统是未来方向。

Perspectives

CRISPR FISHer的活细胞应用标志着FISH进入动态监测时代，但相位分离效率与多色标记兼容性待突破。同步发展计算分析方法（如深度学习去噪）将推动超分辨率成像。

（注：全文严格基于原文事实，未添加非文献内容，专业术语如PP7、LNA等均按原文格式标注。）