综述：嵌合抗原受体转基因递送技术

这篇综述系统探讨了非病毒载体（如脂质纳米颗粒LNP）在嵌合抗原受体（CAR）免疫细胞治疗中的突破性进展，重点分析了mRNA-LNP技术如何通过瞬时表达特性规避病毒载体（如慢病毒）的插入突变风险，为血液肿瘤和实体瘤的下一代细胞治疗提供更安全、可规模化的解决方案。

　　

Highlights

嵌合抗原受体（CAR）T细胞疗法在血液系统恶性肿瘤的临床治疗中取得突破性进展，但传统病毒载体（如慢病毒）存在插入突变致癌风险。非病毒递送技术——尤其是基于电穿孔的转座子系统、CRISPR/Cas9基因编辑工具、病毒样颗粒以及脂质纳米颗粒（LNP）——通过避免基因组有害整合显著降低二次癌症风险。其中，经临床验证的LNP载体凭借其高效递送mRNA的能力，正在推动^{ex vivo}/^{in vivo} CAR-T细胞治疗的革命性发展。

Abstract

当前CAR-T疗法面临病毒载体生产成本高、安全性受限等瓶颈。mRNA因其瞬时表达特性成为CAR工程的新兴选择，而LNP作为非病毒递送平台，既能保障转染效率又可大幅降低制造成本。该技术已展现出在肿瘤和非肿瘤性疾病免疫治疗中的双重潜力，例如通过单次LNP-mRNA注射实现体内T细胞重编程。

技术进展与挑战

病毒载体（如γ-逆转录病毒）虽能实现CAR基因稳定整合，但存在随机插入激活原癌基因的风险。2011年宾夕法尼亚大学团队首次报道慢病毒载体导致治疗相关性白血病病例后，非病毒策略加速发展。电穿孔结合睡美人转座子系统可实现染色体定向整合，但编辑效率仅15-30%。CRISPR/Cas9技术通过精确靶向T细胞受体（TCR）位点提升整合可控性，却面临脱靶效应难题。

LNP-mRNA方案的优势在于：

1. 72小时内快速表达CAR蛋白，避免持续刺激导致的T细胞耗竭
2. 可重复给药调整CAR表达水平
3. 冷冻干燥技术使制剂稳定性达18个月以上
   2022年Nature Biotechnology报道的体内LNP递送使CAR-T制备周期从常规2周缩短至48小时

未来方向

实体瘤治疗需要突破免疫抑制微环境，LNP共递送CAR-mRNA与免疫检查点抑制剂（如PD-1 siRNA）显示出协同效应。在自身免疫疾病领域，表达CAAR（嵌合自身抗体受体）的mRNA-LNP可特异性清除致病B细胞。不过，LNP的肝脏倾向性分布仍是靶向递送的主要障碍，新型离子化脂质体（如可电离脂质DLin-MC3-DMA）的优化将持续推动该领域发展。