基于单B细胞技术的猪源抗PEDV单克隆抗体制备与鉴定研究

本研究针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异株疫苗保护不足的难题，通过荧光激活细胞分选(FACS)技术从猪外周血单核细胞(PBMCs)中筛选抗原特异性单B细胞，成功构建21种猪源单抗(mAbs)。实验证实20种mAbs可特异性结合PEDV全病毒，19种识别核衣壳蛋白(N蛋白)，其中7种可识别PEDV HN2021毒株。该研究为开发PEDV诊断试剂和抗病毒药物提供了重要分子工具。

　　

猪流行性腹泻病毒(PEDV)是困扰全球养猪业的"隐形杀手"，其引发的仔猪腹泻死亡率高达80%-100%。自2010年以来，PEDV变异株G2b型在全球肆虐，现有疫苗如CV777株保护效果有限。更棘手的是，母源抗体难以完全保护仔猪，而病毒高度变异的特性又使精准诊断面临挑战。在这个背景下，河南农业大学等机构的研究团队将目光投向了病毒最保守的核衣壳蛋白(N蛋白)，试图从天然免疫应答中寻找突破口。

研究团队创新性地采用单B细胞抗体技术，从感染PEDV的猪外周血中捕获60个抗原⁺
/IgG⁺
双阳性B细胞。通过荧光激活细胞分选(FACS)、RT-PCR扩增抗体可变区基因，并利用HEK293F细胞表达系统，最终获得21种具有天然配对特性的猪源单抗。实验设计包含三个关键环节：抗原制备（PEDV全病毒、S1D和N蛋白）、B细胞分选平台建立、抗体功能验证体系。

主要研究结果

1. 抗原特异性B细胞分选：成功分离36个PEDV全病毒结合细胞和24个N蛋白特异性B细胞，分选效率达100%。
2. 抗体表达验证：21种mAbs中，20种能特异性结合PEDV（间接ELISA验证），其中19种识别N蛋白，但无一识别S1D蛋白。
3. 毒株交叉反应：免疫荧光(IFA)显示7种mAbs可识别流行毒株HN2021，提示其具有广谱识别潜力。
4. 表位特征分析：Western blotting揭示3种N蛋白mAbs识别线性表位，16种可能识别构象表位，为疫苗设计提供新靶点。

讨论与意义
该研究首次系统建立了猪源抗PEDV单抗制备平台，其创新性体现在：①突破传统鼠源单抗的种属限制，获得天然配对的猪源抗体；②发现N蛋白优势表位，为开发不受病毒变异影响的诊断方法奠定基础；③构建的技术路线可推广至其他动物病毒抗体研发。特别值得注意的是，研究中16种构象表位抗体的发现，暗示N蛋白可能存在以往未被重视的空间结构特征，这为理解冠状病毒免疫逃逸机制提供了新视角。论文发表于《Veterinary Immunology and Immunopathology》，相关技术已申请专利保护，部分抗体正被评估用于乳猪被动免疫治疗的可行性。